Поэтому задачей данного этапа работы явилась разработка липосомальной формы наиболее эффективного Ben5 E.faecalis. Для этого использовали ту же методику, что и для белковых ингибиторов сериновых протеаз: были подобраны такие соотношения белок:липид, при которых при инкубации обоих компонентов происходит образование осадка. После центрифугирования осадок отделяли от супернатанта, в котором находился свободный белок, диспергировали в среде инкубации микобактерий (среда Дюбо) при рН 7,4. Методом экструзии получали ОВ, в которых определяли содержание белка и фосфолипидов. Для получения липосом использовали либо ФХ, либо смесь ФХ:КЛ (1:4). В первом случае связывалось 10% белка, введение КЛ в липосомы увеличивало связывание до 30%.

Далее изучали действие ОВ с бактериоцином на рост M. tuberculosis H37Rv in vitro и in vivo. Рост микобактерий в культуре в течение 6 дней определяли по уровню включения ³Н-урацила в РНК микобактерий. Этот же метод применяли для определения роста M. tuberculosis H37Rv в перитональных макрофагах мышей. Для заражения макрофагов их инкубировали с микобактериями в течение 18 ч, после чего в среду инкубации вводили либо водный раствор Ben5, либо его липосомальную форму. Контролем служил водный раствор рифампицина (1 и 0,1 мкг/мл). Полученные результаты по уровню включения ³Н-урацила в РНК микобактерий в присутствии различных добавок приведены на рис.13.

Видно, что водный раствор Ben5 из E. faecalis (0,1 мкг/мл) подавлял рост M. tuberculosis H37Rv (рис.13а), но никак не влиял на размножение микобактерий в макрофагах (рис.13в). Косвенным подтверждением этого служат и данные по увеличенному содержанию лактатдегидрогеназы в среде инкубации инфицированных макрофагов (рис.13б). В отличии от водного раствора Ben5 его липосомальная форма обладает эффективностью не только в отношении M. tuberculosis H37Rv (рис.13а), но и инфицированных макрофагов (рис.13в).



Рис.13. а) Число импульсов в минуту при включении 3Н-урацила в РНК M. tuberculosis H37Rv; б) уровень активности лактатдегидрогеназы в среде инкубации нативных и инфицированных макрофагов мыши; в) число импульсов в минуту при включении ³Н-урацила в РНК M. tuberculosis H37Rv в инфицированных макрофагах мыши.

При этом отмечается практически нормальный уровень активности лактатдегидрогеназы в среде инфицированных макрофагов (рис.13б).

Полученные результаты указывают на возможность использования липосомальной формы Ben5 как противотуберкулезного препарата in vivo. Для подтверждения этого было исследовано его действие в дозе 10 мкг привнутривенном введении на мышах, зараженных смертельной дозой M. tuberculosis H37Rv (2 х 10⁺⁷ КОЕ). Для сравнения с известными ПТП использовали рифампицин в дозе 75 мкг. Лечение начинали через 1 день после заражения и проводили его в течение последующих 5 дней 1 раз в день. Результаты трех опытов суммированы в табл.5, из которой видно, что внутривенное введение водного раствора Ben5 не оказывало эффекта, а его липосомальная форма удлиняла срок жизни мышей на 30%.

Следует отметить, что в выбранной модели эксперимента мышам вводится смертельная доза M. tuberculosis. В этих условиях рифампицин в данной дозе только удлиняет срок их жизни. Поэтому полученное в эксперименте достоверное увеличение срока жизни зараженных животных при применении липомальной формы Ben5 говорит о перспективности дальнейших исследований с этим препаратом.

Табл. 5. Влияние различных препаратов на продолжительность жизни мышей, зараженных летальной дозой M. tuberculosis H37Rv

№	Экспериментальные группы	Доза препарата/ на мышь	Время жизни животных после заражения (MST ± SD, дни)
1	Лечение отсутствует	-	21 ± 3
2	Водный раствор Ben5	10 мкг	21 ± 3
3	Липосомы из ФХ:КЛ (1:4)	100 мкг	21 ± 2
4	Липосомальная форма Ben5	Ben5 -10 мкг ФЛ -100 мкг	28 ± 3*
5	Рифампицин	75 мкг	34 ± 6

*P < 0.05 (Gohan's criterion).

Проведенные исследования наглядно демонстрируют преимущества липосомальных форм ПТП перед их водным раствором, которые во многом обусловлены способностью липосом фагоцитироваться макрофагами и направленно транспортировать лекарство к месту локализации микобактерии.

В ходе проведения экспериментов, описанных в двух предыдущих разделах работы, были получены важные результаты, касающиеся характера взаимодействия частиц из фосфолипидов, различающихся составом и структурой (мицеллы, однослойные и мультиламеллярные везикулы), с «дополнительными» компонентами (низкомолекулярными гидрофобными соединениями, пептидами, белками) и показано влияние этих соединений на различные свойства (структурную организацию, стабильность и проницаемость) фосфолипидных мембран. В некоторых случаях это приводило к повышению эффективности фармакологического действия везикул из фосфолипидов, установленной например при изучении действия ДАГ-содержащих липосом на процесс заживления операционной раны.

Эти результаты позволили нам перейти к исследованию чрезвычайно важной с медицинской точки зрения проблемы использования фосфолипидов для создания новых форм препаратов для лечения туберкулеза - рифампицина и рифабутина. Для получения препаратов с максимально высоким включением антибиотиков в фосфолипидные везикулы необходимо было сначала изучить их физико-химические свойства в широком интервале рН и взаимодействие с различными модельными мембранами.

ГЛАВА 3. Взаимодействие низкомолекулярных антибиотиков рифамицинового ряда с модельными мембранами

Проблеме разработки липосомальных форм различных ПТП посвящено большое число исследований. Задачей данного этапа настоящей работы явилась разработка такого препарата, в котором бы содержание антибиотика в водной фазе значительно превышало бы его растворимость. Для решения этой задачи на первом этапе работы изучили ряд физико-химических параметров антибиотиков рифампицина и рифабутина, которые эффективно подавляют жизнеспособность возбудителя туберкулеза M. tuberculosis, и их взаимодействие с модельными мембранами в различных агрегационных состояниях (мультиламеллярные везикулы и ОВ) и при разных рН среды.

Другой задачей данного этапа работы являлась разработка на основе полученных результатов стабильной липосомальной формы рифампицина и оценка ее эффективности в отношении M. tuberculosis in vitro и in vivo. Выбор именно рифампицина в качестве субстанции связан в первую очередь с его более выраженной по сравнению с рифабутином токсичностью. Не последнюю роль сыграли также низкая цена субстанции (по сравнению с рифабутином рифампицин в 10 раз дешевле) и тот факт, что рифампицин является препаратом первого ряда и широко применяется при лечении туберкулеза.

3.1 Физико-химические характеристики рифампицина и рифабутина

Рифампицин применяется как противотуберкулезный препарат более тридцати лет, и накоплен значительный материал о его свойствах и действии. Напротив, рифабутин введен в медицинскую практику сравнительно недавно и о его свойствах (растворимости, константах ионизации и коэффициенте распределения) в литературе представлена очень скудная информация. К сожалению, практически нет данных и о свойствах рифабутина при различных рН среды. Это важно с той точки зрения, что воспалительный процесс, который присутствует при развитии туберкулеза, приводит к понижению рН ткани.

В связи с этим задачей на данном этапе явилось изучение влияния рН среды на растворимость антибиотиков и на их взаимодействие с модельными мембранами. Для количественной оценки такого взаимодействия использовали коэффициент распределения этих соединений в системах липосомы/вода и октанол/вода.

Рифампицин и рифабутин являются полусинтетическими антибиотиками, производными рифамицина SV. Их формулы приведены на рис.14, а зависимость от рН растворимости антибиотиков и коэффициента распределения в системе октанол/вода представлена на рис. 15 -17.

А) Б)

Рис.14. Структурные формулы рифампицина (А) и рифабутина (Б)



Рис. 15. Зависимость от рН среды коэффициента распределения рифампицина в системе октанол/вода ( столбики) и заряда молекулы (линия).

Рис.16. Зависимость от рН среды растворимости рифампицина .

Рис.17.Зависимость растворимости рифабутина (?) и его коэффициента распределения в системе октанол/вода (¦) от рН среды.

Как видно из этих данных, свойства обоих антибиотиков изменяются при изменении рН среды, что связано с наличием в их молекуле ряда ионизирующихся групп.

Данные по определению рКа в молекулах обоих антибиотиков будут представлены ниже, а в данном разделе представлялось необходимым остановиться на сравнительном определении коэффициентов распределения антибиотиков в двух системах: октанол/вода и липосомы (ОВ)/вода при рН 6,4. Выбор данного значения обусловлен тем, что при попадании в организм человека M.tuber проникает в макрофаги путем фагоцитоза и именно там, в фагосомах, происходит ее размножение. Известно, что рН фагосомы равно 6,4. Таким образом, исследование свойств антибиотиков при этом рН моделирует его поведение в фагосоме. Согласно полученным результатам, суммированным в табл. 6, рифампицин имеет одинаковые значения Кд для обеих систем.

Табл.6. Коэффициенты распределения антибиотиков в различных системах при рН 6,4 и 0,15 М NACI

№	Исследуемая система	Метод измерения	РИФАМПИЦИН	РИФАБУТИН
1	МЛВ из ФХ	Разделение фаз	80±30	284±55
2	БОЛВ из ФХ	Тушение флуоресценции метки (антрил-ФХ)	Нет данных	395±75
3	Октанол/вода	Разделение фаз	60±20	1580±300
4	Октанол/вода	Расчет по Программе ACD/PM	50	1900

Это говорит о том, что он одинаково хорошо проникает как в изотропную фазу октанола, так и в липосомы, которые имеют выраженную анизотропию и структуры, и свойств.

Напротив, для рифабутина переход в октанол протекает легче, чем в липосомы. Возможно, это происходит за счет выраженных электростатических взаимодействий с поверхностью фосфолипидного агрегата, о котором говорилось выше. Для рифампицина такое взаимодействие минимально, и он сразу погружается в гидрофобную область мембраны.

3.1.1 Определение констант ионизации

Согласно литературным данным, в молекуле рифампицина присутствуют две ионизирующихся группы с рКа 7,9 и 1,7, которые были соотнесены с гидроксилом нафтола и азотом пиперидина.

Такие сведения о рифабутине отсутствуют. В результате собственных исследований методами спектрофотометрии и потенциометрического титрования установили, что в молекуле рифабутина присутствуют три ионизирующиеся группы, имеющие следующие рКа:

1) 6,5, которую приписали ОН-нафтола;

2) 3,5. (N-имидазола);

3) 9,5 (N-пиридина).

Эти результаты позволили рассчитать содержание отдельных ионизационных форм антибиотиков (аниона, цвиттериона, катиона) в зависимости от рН среды. Оказалось, что в интервале рН 6,4-7,4 рифампицин находится в основном в виде аниона и цвиттериона, а рифабутин, напротив, в виде катиона и цвиттериона (данные не приводятся).

Различие в знаке заряда в молекулах антибиотиков должно отразиться на характере их взаимодействия с модельными мембранами, содержащими заряженные фосфолипиды. Для подтверждения этого предположения изучали связывание обоих антибиотиков с липосомами (ОВ) из смеси ФХ:КЛ с различными содержанием КЛ. Для этого ОВ, исходно содержащие один из антибиотиков, методом гель-фильтрации отделяли от свободного антибиотика, а во фракции липосом спектрофотометрически определяли его содержание. На рис.18 представлен процент связывания антибиотиков с ОВ различного липидного состава. Видно, что рифампицин в наибольшей степени связывается с липосомами из ФХ, а введение КЛ уменьшает связывание. Для рифабутина наблюдается противоположная ситуация: увеличение содержания КЛ в составе липосом увеличивает его связывание. Этот результат представляется логичным, т.к. часть молекул рифабутина несет положительный заряд.

Рис.18. Включение рифабутина (светлые столбики) и рифампицина (темные столбики) в липосомы из ФХ с различным содержанием КЛ. Физраствор, рН среды 6,2-6,4

Для оптимизации условий, при которых достигается наибольшее включение антибиотиков в липосомы помимо варьирования фосфолипидного состава изучили влияние ионной силы и рН в интервале 6,4-7,4. Обнаружено, что увеличение ионной силы приводит к уменьшению связывания рифабутина с отрицательно заряженными липосомами (ОВ) и никак не влияет на этот процесс для рифампицина. Изменение рН в этом интервале не сказывалось на степени связывания.

В результате проведенных исследований были определены условия, при которых солюбилизация антибиотиков фосфолипидами позволила значительно увеличить их содержание в водной фазе : рифампицина в 5-10 раз, рифабутина - в 100 раз и перейти к разработке лекарственной формы рифампицина.

3.2. Продукты превращения рифампицина в водном растворе и в липосомальной форме при разных режимах хранения

К лекарственной форме препарата предъявляются два основные требования: наличие специфической активности и стабильность при хранении в течение не менее года. Как известно, рифампицин очень нестабильный препарат, который легко окисляется и подвергается быстрой деструкции. В результате этого образуются большое число продуктов: хинон рифампицина, 3-формилрифамицин SV, N-оксид рифампицина, 25-дезацетилрифампицин (см. рис.19).

Рис. 19. Структурные формулы: а) рифампицина; б) 3-формилрифамицина SV; в) 25_дезацетилрифампицина; г) N-оксид рифампицина; д) хинон рифампицина или 25-дезацетилрифампицина

В связи с тем, что определение его антибактериальной активности в отношении медленно растущей микобактерии туберкулеза занимает как минимум 3 недели, вопрос о стабильности рифампицина являлся первоочередным.

Табл.7. Характеристики РФ, рифамицина SV и продуктов их превращения

№	Название	Максимумы на электронном спектре (этанол), нм	Rf (системы А/Б)	Масс-спектры, m/z
1	Рифампицин	475	338	240	0.5 / 0.6	821.4 822.3 823.3
2	Хинон рифампицина	545	340	272	0.6 / 1.0	819.2 820.2 821.4
3	3-формилрифамицин SV	485	322	225	0.35 / 0.4	724.4 725.3 726.3
4	Рифамицин SV	450	312	230	0.0 / 0.70	696.3 697.3 698.3
5	Хинон рифамицина SV	530	312	230	0.70 / 1.0	696.1 697.1 698.1
6	25-дезацетилрифампицин	475	338	240	0.35 / 0.5	779.3 780.3 781.3
7	Хинон 25_дезацетилрифампицина	535	336	268	0.40 / 1.0	779.2 780.1 781.6
8	N-оксид рифампицина	475	338	240	0.05 / 0.1	837.4 838.4 839.5
9	Хинон N-оксида рифампицина	540	334	262	0.15 / 1.0	-

* - масс-спектр получен при детектировании положительных ионов

Для идентификации продуктов, образующихся при хранении липосомальной формы рифампицина, сначала получили различные продукты деструкции и окисления этого антибиотика при инкубации его водного раствора (1 мг/мл) в различных условиях. Компоненты реакционной смеси разделяли методом двумерной ТСХ в системах А (хлороформ : метанол (9:1)) и Б (хлороформ : этанол (1:1)). Пятна с пластинок элюировали этанолом и анализировали их методом ВЭЖХ- на колонке Hypersil C₁₈ 2503 мм в градиенте ацетонитрила от 55% до 80% в воде, содержащей 0.2 % трифторуксусной кислоты. Наличие рифампицина и продуктов его деструкции детектировали спектрофотометрически (254 нм). Масс-спектры получали методом электроспрей-ионизации на тандемном масс-спектрометре с ионной ловушкой в режиме детектирования отрицательных ионов.

В табл. 7 представлены характеристики широкого круга продуктов превращения рифампицина, полученных по известным методикам и выделенных методом ТСХ. Их наличие сделало возможным идентификацию и количественное определение продуктов деструкции и окисления рифампицина в составе липосом при хранении в различных режимах.

Для стабилизации рифампицина и уменьшения содержания его основного продукта окисления - хинона рифампицина, в липосомальный раствор рифампицина вводили 0,5 % аскорбиновой кислоты. Этот препарат в виде раствора и в виде лиофилизированного порошка (криопротектор- мальтоза) хранили в течение года при +4⁰ (рекомендуемый режим хранения) и при 25⁰ С в течение 3 мес (ускоренное хранение). Состав образцов анализировали 1 раз в месяц.

Обнаружено, что при хранении препарата при +25⁰С уменьшение содержания рифампицина только за 1 месяц составило более 10%, в то время как при .+4⁰ С доля антибиотика в первые 6 месяцев сохранялась на уровне 95% от исходного, а через год снизилась до 90% (см. табл.8).

Табл. 8. Содержание рифампицина (РФ) в различных препаратах при хранении +4⁰С и значения МИК этих препаратов в отношении M. tuberculosis H37Rv (10⁸ клеток/мл) при различных сроках хранения.

№	Препарат	Лекарст.форма	Содержание , мг/мл*	Срок хран.мес	МИКРФ,мкг/мл
			РФ	3-ФР	Х-РФ
1	РФ*	Р-р	1.0	0	0	0	2-20
2	Липосомы с РФ	Р-р	5.0	0	0	0	2-20
3	Липосомы с РФ	Лиофил порошок	**5.0	0	0	0	2-20
4	Липосомы с РФ	Р-р	4.5	0.4	<0.1	12	12-25
5	Липосомы с РФ	Лиофил порошок	5.0	0	<0.1	12	12-25
6	Липосомы с РФ	Р-р	3.0	1.8	<0.1	18	6-20
7	Липосомы с РФ	Р-р	2.5	2.2	<0.1	24	6-20

*Сокращения в табл.8: РФ-рифампицин, 3-ФР - 3_формилрифамицин SV, Х-РФ- хинон рифампицина.

** Содержание рифампицина приводится для лиофилизированного порошка при диспергировании его в 1 мл физиологического раствора.

При этом в препарате нарастало в основном содержание 3-формилрифамицина SV, в то время как доля хинона рифампицина была незначительна и не превышала 1%. Состав лиофилизированного порошка липосом с рифампицином, напротив, сохранялся неизменным через 1 год хранения.

Полученные результаты говорят о том, что лекарственная форма липосомального рифампицина возможна только в виде лиофилизированного порошка, стабилизированного добавлением аскорбиновой кислоты. Однако для проведения экспериментов in vitro и in vivo можно использовать раствор липосом с рифампицином в течение полугода после его получения.

3.3 Антибактериальная активность рифампицина в липосомальной форме в отношении M. tuberculosis при различных сроках хранения препарата

Эксперименты по определению антимикробной активности водного раствора рифампицина, его липосомальной формы (раствор и лиофилизированный порошок) в отношении M. tuberculosis Н37Rv проводили совместно с сотрудником ЦНИИ туберкулеза РАМН к.м.н. Л.П.Мартыновой.

Исследовалась активность препаратов, которые хранились различные сроки (до 2-х лет) при 4 ⁰С. Полученные результаты приведены в табл. 8, из которой следует, что, во-первых, нет существенной разницы между антимикробной активностью водного раствора рифампицина и его липосомальной формы. Во-вторых, антимикробная активность препаратов при длительном хранении практически не изменяется. Это позволяет утверждать, что продукт деструкции рифампицина 3_формилрифамицин SV обладает антимикробной активностью, близкой к рифампицину, что хорошо согласуется с литературными данными. Благодаря полученным результатам о наличии антимикробной активности его липосомальной формы в течение длительного времени оказалось возможным использовать этот препарат в экспериментах in vivo.

3.4 Действие in vivo. липосом, содержащих рифампицин, в отношении M. Tuberculosis

Данная часть исследований проведена совместно с сотрудниками отдела иммунологии ЦНИИТ РАМН к.б.н. И. В..Бочаровой, к.м.н. В.В.Мищенко, д.м.н. Л.Л. Посохиным. Схема эксперимента была следующей: мышей заражали внутривенным введением M. tuberculosis Н37Rv в ретроорбитальный синус глаза в дозе 5х10⁵ КОЕ; лечение осуществляли через 2 недели после заражения, ежедневно, в течение 2-х месяцев; липосомальную форму рифампицина вводили ингаляционно.

В эксперименте использовали 4-е группы мышей (по 10 мышей в каждой группе), первая из которых (№1) была контрольной, в этой группе зараженные M. tuberculosis животные не получали лечения. В группе №2 зараженных животных лечили рифампицином и изониазидом (1:1 по весу) в дозе 1,5 мг смеси на мышь; препараты вводили внутрижелудочно. Чтобы оценить эффективность данной схемы лечения, в группе №3 животные получали внутрижелудочно только один изониазид (доза 750 мкг/мышь). И наконец, в опытной группе №4 зараженные животные получали и изониазид, и рифампицин, но изониазид вводился внутрижелудочно (доза 750 мкг/мышь), а рифампицин в липосомальной форме ингаляционно (доза 37,5 мкг/мышь). В отдельных экспериментах было показано, что ингаляционное введение липосом, не содержащих антибиотика, не приводит к снижению накопления микобактерий в органах зараженных животных в данной схеме эксперимента и не предотвращает летальный исход.

Результаты микробиологического исследования, суммированные в табл.9, свидетельствуют о выраженности туберкулезного процесса в контрольной группе животных. В легких и селезенке этих животных накопление M.tuberculosis составляло 10⁶ и 10⁵ КОЕ/орган соответственно.

Лечение зараженных животных только одним изониазидом (группа №3) существенно снижало число микробных тел, но не приводило к полному выздоровлению, т.е. болезнь принимала хроническую форму. Напротив, при совместном применении и рифампицина и изониазида в виде растворов, вводимых внутрижелудочно, лечение по предложенной схеме оказалось высоко эффективным. Согласно результатам, в органах животных этой группы (№2) вообще не выявлено накопления M.tuberculosis.

Замена водного раствора рифампицина на его липосомальный раствор, который вводили животным ингаляционно (группа №4) в отличии от животных группы №2, дала полностью положительный результат: после окончания лечения в органах животных микобактерий не обнаружено. Однако следует подчеркнуть, что доза рифампицина в липосомальной форме (группа №4) была в 15 раз меньше дозы водного раствора рифампицина, вводимого внутрижелудочно (группа №2). Кроме того, согласно гистологическим данным этот препарат не обладает гепатотоксичностью и улучшает структуру легочной ткани по сравнению результатами, полученными для группы №2.

Эти результаты говорят не только о повышенной эффективности действия рифампицина в липосомальной форме, но и позволяют убедиться в дополнительных терапевтических эффектах самих фосфолипидов.

Выводы

1. Обнаружено, что физико-химические свойства модельных мембран, изученные на примере однослойных везикул, изменяются при введении в их состав метаболита фосфолипидов 1.2-диацилглицерина: уменьшается стабильность липосом и их мембраны становятся проницаемыми для ионов кальция.

2. Показано, что механизм этого явления обусловлен способностью 1.2-диацилглицерина модифицировать бислойную упаковку фосфолипидов.

3. Установлено, что введение 1.2-диацилглицерина в биологические мембраны также приводит к формированию кальциевых каналов проницаемости, которые ингибируются верапамилом. Аналогично действует арахидоновая кислота, но не другие исследованные жирные кислоты.

4. Обнаружено, что введение 1.2-диацилглицерина и арахидоновой кислоты в однослойные везикулы усиливает их действие на клетки и ткани: возрастает интенсивность кислородного взрыва макрофагов; увеличивается скорость заживления операционной раны кожи.

5. Показано образование гидрофобных комплексов водорастворимых белков-ингибиторов протеаз (основного панкреатического ингибитора трипсина и соевого ингибитора Баумана Бирк) с мультиламеллярными везикулами не только из отрицательно заряженных фосфолипидов, но и из цвиттер-ионов.

6. Установлено сохранение ингибирующей активности белков в составе комплексов, которая увеличивается в присутствии ионного детергента из-за освобождения активного центра ингибиторов, ранее блокированного в составе комплекса.

7. Получена липосомальная форма бактериоцина, которая подавляет рост M.tuber H37Rv не только в культуральной среде, но и в инфицированных макрофагах. Лечение этой формой бактериоцина животных, зараженных летальной дозой M.tuber H37Rv, достоверно увеличивает продолжительность жизни.

8. Установлено, что при физиологических условиях рифампицин и рифабутин существует в различных ионизационных формах и по-разному связываются с однослойными везикулами, содержащими отрицательно заряженные фосфолипиды.

9. Включение противотуберкулезных антибиотиков в липосомы при определенных условиях позволяет увеличить содержание в водной фазе рифампицина -в 10 раз, а рифамбутина- в 100 раз.

10. При изучении стабильности липосомальной формы рифампицина в виде раствора и лиофилизированного порошка при хранении обнаружено, что оба препарата сохраняют высокую антибактериальную активность в отношении M.tuber H37Rv, но только один из них (лиофилизированный порошок) выдерживает хранение в течение 1 года.

11. В опытах на животных, зараженных M.tuber H37Rv, установлено, что разработанная нами липосомальная форма рифампицина обладает повышенной эффективностью действия по сравнению с водным раствором антибиотика и при этом не является гепатотоксичной.

Публикации по теме диссертации

1. Образцов В.В., Селищева А.А., Козлов Ю.П. Различный характер взаимодействия окисленного. и восстановленного цитохрома с с везикулами фосфолипидов // Биохимия, 1978, т.43, в.11, с.2047-2054.

2. Третьяк А.Г., Селищева А.А., Василенко И.А, Гросхейде В., Викторов А.В. Лимаренко И.М. Козлов Ю.П. Влияние фосфоинозитидов на структуру везикул// ДАН, 1979, т.249, в.1, с.230-234.

3. Сорокоумова Г.М. Василенко И.А. Швец В.И. Селищева А.А., Боровягин В.Л. Влияние метаболитов фосфолипидов на структуру модельных мембран// Биоорганич. Химия, 1983, т.8, в.9, с.1106-1111.

4. Образцов В.В., Селищева А.А., Козлов Ю.П. О влиянии конформации молекулы белка на характер его взаимодействия с везикулами // Биофизика,1983, т.26, в.3, с.412-417.

5. Селищева А.А., Козлов. Ю.П. Роль ионов кальция в процессе синаптической передачи. // Биол. науки ,1984, в.9, с.5-21.

6. Селищева А.А., Брусованик В.И., Неустроева Е.А., Маркова Е.Е Действие фосфолипаз на транспорт Са²⁺ в синаптосомы // ДАН, 1985, т.281, в.1, с.223-225.

7. Шрагин А.С. Василенко И.А. Селищева А.А., Швец В.И. Влияние метаболитов фосфолипидов на слияние модельных мембран // Биол. Мембраны,1985, т. 2, в.8, с 789-795.

8. Брусованик В.И., Селищева А.А., Прилипко Л.Л., Козлов Ю.П., Кулене В.В. Активация транспорта Са²⁺ в синаптосомы фосфолипазой С, специфичной к фосфатидилинозитам// Биохимия, 1986, т.51, в.8, с.1329-1333.

9. Шрагин А.С. Селищева А.А., Василенко И.А., Швец В.И. Проницаемость и слияние мембран, продуцируемое продуктами метаболизма ФИ.// ДАН, 1986, т.287, в.3, с.717-720.

10. Селищева А.А., Козлов Ю.П. Метаболизм фосфолипидов и биологические мембраны, Иркутск, Изд.ИГУ, 1988, 70 стр.

11. Брусованик В.И. Селищева А.А., Кравцов Г.М., Козлов Ю.П. Сопряжение фосфоинозитольного цикла с транспортом Са через мембрану синаптосом мозга крыс// Нейрохимия, 1988, т.7, в.3, с.357-367.

12. Селищева А.А., Василенко И.А. Воронин М.В., Швец В.И.Особенности кинетики гидролиза фосфолипидов фосфолипазой С из Bac.cer. Гидролиз фосфатидилхолина в присутствии ДОХ.// Биохимия, 1990, т. 55, с.87-93.

13. Мирошникова Т.А. Воронин М.В. Селищева А.А., Василенко И.А. Особенности кинетики гидролиза фосфолипидов фосфолипазой С в различных агрегатных состояниях // Биохимия, 1993, т.58, в.3,с.340-347.

14. Sorokoumova G.M. Shragin A.S. Vasilenko I.A. Selishcheva A.A., Shvetz V.I. The effect of diacylglycerol on the structural organization of model membranes and their fusion // J. Lip. Res., 1994, v.4, p.255-271.

15. Атруз О.М. Сорокоумова Г.М., Селищева А.А., Скрябин Г.А., Биличенко Т.Н., Орлов С.Н. Чучалин А.Г. Взаимодействие альвеолярных макрофагов больных и здоровых людей с липосомами // Бюлл. экспер.биол. мед., 1997, т.124, в.11, с.520-523.

16. Атруз О.М., Селищева А.А.,Сорокоумова Г.М., Василенко И.А. Индукция кислородного взрыва в моноцитах крови человека // Бюлл.экспер. биол. мед. 1998, т.126, в.7, с.63-68.

17. Атруз О.М., Селищева А.А., Сорокоумова Г.М. Скрябин Г.А., Василенко И.А. Чучалин А.Г. Влияние липосом различного липидного состава на развитие кислородного взрыва в моноцитах крови и альвеолярных макрофагах человека// Биол. мембраны, 2000, т.17, в.5, с.510-518.

18. Мартынова О.М., Сорокоумова Г.М., Тюрина О.П., Селищева А.А., Швец В.И., Ларионова Н.И. Взаимодействие трипсина с мультиламеллярными везикулами из липидов сои // Биохимия, 2000, т.65, в.9, с.1240-1246.

19. Мартынова О.М., Тюрина О.П., Селищева А.А., Сорокоумова Г.М., Алексеева С.Г., Швец В.И. Отделение периферических полипептидов, содержащихся в липидных экстрактах сои, и их влияние на структурную организацию фосфолипидов // Бюлл. экспер. биол. мед., 2000, т.129, в.2, с.159-162.

20. Сорокоумова Г.М., Селищева А.А., Каплун А.П. Фосфолипиды. Методы их выделения, обнаружения и изучения физико-химических свойств липидных дисперсий в воде. Учебное пособие.2000. Москва. Моск. Академия тонкой хим.технологии.70с.

21. Корнилова З.Х., Селищева А.А., Перельман М.И. Влияние липосом из фосфатидилхолина на регенерацию операционной раны легкого морской свинки// Бюлл. экспер.биол. мед. 2001, т.131, в. 2, с.228-231.

22. Atruz O.M., Skrjabin G.A.,Vasilenko I.A., Sorokoumova GM., Selishcheva A.A. Effect of liposomes of different phospholipid composition on the induction of respiratory burst in human blood monocytes and alveolar macrophages // Membr. Cell Biol., 2001, v.14, N 5, p.639-649.

23. Тюрина О.П., Шарф Т.В., Сорокоумова Г.М., Швец В.И., Селищева А.А., Ларионова Н.И. Комплексообразование основного панкреатического ингибитора протеиназ с мультиламеллярными везикулами фосфолипидов сои // Биохимия, 2001, т.66, в.3, с.419-424.

24. Сорокоумова Г.М. Селищева А.А.,Алексеева С.Г. Шарф Т.В. Швец В.И. Тюрина О.П. Влияние водорастворимых немембранных белков на структурную организацию фосфолипидов // Биофизика, 2002, т.47, в.2, с.268-276.

25. Баукова Н.А., Алексеева С.Г., Сорокоумова Г.М.*, Селищева А.А., Мартынова О.М., Рогожкина Е.А., Швец В.И. Белки и сапонины присутствуют в липидном препарате, полученном при экстракции соевой муки // Прикл. биохим. микробиол. 2002, т. 38, в.2, с.183-189.

26. Balkina A., Sharf T., Tiourina О., Ollivon M. Sorokoumova G., Larionova N. Interaction of the water - soluble protein aprotinin with liposomes: gel-filtration, turbidity studies and ³¹PNMR studies // J. Lip. research, 2002, v.13, n.3-4, p.213-219.

27. Селищева А.А., Алексеев С.Б, Смирнова И.П., Подборонов В.М. Эффективность антигерпетического действия различных лекарственных форм L-лизин-б-оксидазы // Антибиотики и химиотерапия, 2003, т. 48, в.1,с.9-13.

28. Сорокоумова Г.М., Селищева А.А., Маликова Н.М., Минина А.С., Швец В.И. Включение изониазида в липосомы разного липидного состава // Бюлл. эксперим. биол. мед. 2004, т. 137, №1, с.24-26.

29. Минина А.С., Селищева А.А., Сорокоумова Г.М., Маликова Н.М., Калашникова Т.Н., Швец В.И. Включение рифампицина в многослойные и однослойные везикулы (липосомы) разного липидного состава //Биофизика , 2004, т.49, №4, с. 647-679.

30. Istarova T., Semenova M., Sorokoumova G., Selishcheva A., Belyakova L., Polikarpov Y., Anokhina M. Effect of pH on the interactions of sodium caseinate with soy phospholipids in relation to the foaming ability of their mixtures // Food Colloids, 2004, v.19, N3, p.429-440.

31 Шакина Ю.Н., Востриков В.В., Сорокоумова Г.М., Селищева А.А., Швец В.И. Взаимодействие рифабутина с модельными мембранами// Бюлл. эксперим. биол. мед. 2005, № 12 , с.664-667.

32. Шакина Ю.Н., Востриков В.В. Сорокоумова Г.М. Селищева А.А. Швец В.И. Зависимость свойств рифабутина и его включения в липосомы от рН среды//

Антибиотики и химиотерапия 2005, т.50, №7, стр.3-7.

33. Балкина А.С., Селищева А.А., Сорокоумова, Г.М., Ларионова Н.И. Взаимодейс-твие нативного соевого ингибитора типа Баумана Бирк и его гидрофобизирован-ных производных с мультиламеллярными везикулами соевых фосфолипидов// Биохимия, 2006, т.71, №1, с.84-89.

34. Balkina A.S., Selischeva A.A., Sorokoumova G.M., Ollivon M., Larionova N.I. Encapsulation of Bowman-Birk soybean proteinase inhibitor within zwitterionic phospholipid multilamellar vesicles // J.Drug Delivery. Sсience Technol. 2006, v.16, №4, p.34-39.

35. Голышевская В.И., .Селищева. А.А., Мартынова Л.П., Лепеха Л.Н.,

Калашникова Т.Ю, Корнилова З.Х., Ерохин В.В, Розенберг О.А. Оценка эффек-

тивности действия липосомальной формы изониазида in vitro// Проблемы

туберкулеза и болезней легких, 2006, №8, с.61-64.

36. Востриков В.В., Селищева А.А Сорокоумова Г.М., Швец В.И. Коэффициент распределения рифабутина и его ионизированных форм в различных системах.// Биомембраны 2007, т.24, №.2, с.169-174.

37. Востриков В.В., Селищева А.А Сорокоумова Г.М., Швец В.И. Определение коэффициента распределения рифабутина методом флуоресценции // Биофизика 2007 , т. 52, №2, с.125-128.

38. Sosunov V., Mischenko V., Eruslanov B., Svetoch E., Shakina Y., Stern N., Majorov K., Sorokoumova G., Selishcheva A., Apt A. Antimycobacterial activity of bacteriocins and their complexes with liposomes// J Antimicrob Chemother. 2007, v. 59 (5), p. 919-925.

39. Vostrikov V., Selishcheva A , , Sorokoumova G.,. Shakina Y. , Shvetz V.I., Savel'ev O., Polshakov V. Distribution Coefficient of Rifabutin in Liposome/Water System as Measured by Different Methods// Eur. J. Pharm. Biopharm, 2007, v.68 (1), p.120-126.

40. Трошкина О.А., Салина Е.Г, Сорокоумова Г.М., Капрельянц А.С., Селищева А.А. Влияние липосом на рост и чувствительность M. smegmatis к изониазиду. // Прикладная биохимия и микробиология. 2007,т.43, №1, с.47-52.

41. Шакина Ю.Н., Трошкина О.А., Петрова Е.Е., Салина Е.Г., Сорокоумова Г.М., Швец В.И., Капрельянц А.С., Селищева.А.А. Чувствительность к противотубер-кулезным препаратам M. smegmatis, выращенной на средах, содержащих различные углеродные субстраты. // «Ж. микробиол., эпидемиол.иммун.» 2007, в.6, c 24-28.