Осторожно! При попадании фенола на кожу вызывает ожоги. Растворить расплавленный фенол в 100 мл воды.

Рабочий раствор 3. Рабочий раствор карболового фуксина - в 90 мл полученного раствора фенола (раствор №2) добавить 10 мл насыщенного раствора фуксина (раствор №1).

Раствор 4. Обесцвечивающий раствор серной кислоты (25%) - к 75 мл дистиллированной воды осторожно долить 25 мл концентрированной серной кислоты, постепенно наслаивая ее по стенкам сосуда, смешать. Содержимое нагреется.

Или: обесцвечивающий раствор соляной кислоты (3%) - к 97 мл 96% этилового спирта осторожно добавить 3 мл концентрированной соляной кислоты.

Всегда медленно добавляйте кислоту в спирт, а не наоборот! Смесь может нагреться.

Раствор 5. 0,3% раствор метиленового синего - растворить 0,3 г хлорида метиленового синего в 100 мл дистиллированной воды.

Переходные материалы и реактивы

Предметные стекла; 25х75 мм; 1,1-1,3 мм толщиной (на 1 год).

Вата хлопковая.

Восковые карандаши или алмазные ручки или несмываемые водой фломастеры.

Фильтровальная бумага, фильтры диаметром 15 см №1.

Перчатки резиновые.

Салфетки для линз.

Шариковая ручка черная или синяя.

Шариковая ручка красная.

Петля бактериологическая, нихромовая, 1 мм диаметром.

Деревянные палочки-аппликаторы.

Реактивы

Фуксин основной, х.4.

Спирт этиловый 96%, х.4 (для приготовления спиртового фуксина).

Фенол кристаллический, х.4.

Метиленовый синий, х.4.

Реактивы для обесцвечивания:

- серная кислота, 96% х.4, или

- солянокислый спирт 3%

- соляная кислота, концентрированная, х.4

- спирт этиловый, 96%, х.4

Спирт этиловый технический.

Иммерсионное масло.

Ксилол.

Глицерин.

Деинфектанты (5%НДез).

Учет результатов микроскопического исследования

Количество КУМ являет очень важным информационным показателем, так как оно характеризует степень эпидемиологической опасности больного и тяжесть заболевания. Поэтому микроскопическое исследования должно быть не только качественным, но и количественным. При использовании объектива 90х или 100х окуляра 7х10 (общее увеличение равно 630х 1000х) используется следующая градация результатов световой иммерсионной микроскопии.

Градация результатов микроскопического исследования

Отрицательный результат

Для всех препаратов, в которых в 300 полях зрения не были найдены КУМ, выдается результат «КУМ не обнаружены» - «отриц.».

Результат не оценивается

По данным многочисленных исследований результат микроскопии «1-3 КУМ на 300 п.з.» не подтверждается методом посева. Поэтому этот результат практикуется как «сомнительный», в форме ответа такой образец диагностического материала не оценивается. По решению лечащего врача такой анализ должен быть повторен.

Положительный результат

Результат вписывается красными чернилами в лабораторный журнал и в бланк ответа. Число КУМ, найденных в мазке, указывает степень контагиозности больного, а также форму туберкулезного процесса. В связи с этим, результаты должны быть представлены в количественном выражении.

Различают 4 уровня положительного ответа:

- единичные - указывается количество КУМ на 100 полей зрения.

- 1+

- 2+

- 3+

Микроскопические методы исследования играют очень важную роль в выявлении и gs туберкулеза.

- gs tbs легких бактериоскопическим методом проста, достаточно эффективна, экономически выгодна, так как не требует особого оборудования и химических реактивов.

- преимуществом бактериоскопического метода исследования является также быстрое получение результата.

- данный метод позволяет в короткие сроки выявить наиболее эпидемически опасных больных туберкулезом.

При микроскопическом исследовании мазка из диагностического материала нельзя определить видовую принадлежность выявленных КУМ и специфически идентифицировать возбудитель туберкулеза. В связи с этим, как правило, микроскопический метод сопровождается более чувствительным и результативным методом исследования - методом посева.

Морфологическая характеристика КУМ по методу Циля-Нильсона

КУМ туберкулеза имеют в длину 1-10 мкм, в ширину 0,2-0,6 мкм, обычно они видны в виде тонких изящных палочек, но иногда можно обнаружить изогнутые или извитые варианты. Внутри отдельных микробных клеток могут обнаруживаться участки наиболее интенсивного окрашивания, в результате чего они похожи на бусы, а более слабо окрашенные участки могут быть видны в виде полос.

Некоторые другие микроорганизмы могут иметь различные формы от длинных палочек до коньковидных форм с различной интенсивностью окрашивания.

Лабораторный журнал должен содержать следующую информацию.

- Порядковый лабораторный номер.

- Фамилию, имя, отчество больного.

- Пол.

- Возраст.

- Номер истории болезни.

- Название медицинского учреждения, направившего материал на исследование.

- Основание для проведения исследования.

- Результат исследования.

Положительный результат в журнале пишут красными чернилами

Причины ошибок при микроскопических исследованиях.

Ложноположительные результаты могут быть при:

- Плохая обработка многоразовых флаконов для сбора материала, в которых могут оставаться КУМ.

- Повторное использование прозрачных стекол после положительных результатов.

- Применение прозрачного стекла с царапинами и другими дефектами, вследствие чего появляются артефакты. Красная краска может задерживаться на царапинах.

- Использование плохо профильтрованного или длительно хранившегося фуксина, содержащего кристаллы.

- Недостаточное обесцвечивание мазка, что может привести к сохранению красной окраски на некоторых КУМ.

Неспецифические методы лабораторной диагностики

К неспецифическим методам лабораторной диагностики туберкулеза относятся общеклинические и биохимические исследования.

Анализ мокроты.

Мокрота собирается утром, натощак, до приема пищи, получают путем откашливания. Следует избегать попадания в образец слюны и секрета носоглотки и синусов. Мокроту собирают в чистую сухую широкогорлую посуду трехкратно. Характер мокроты при туберкулезе слизистый или слизисто-гнойный. Примесь крови может свидетельствовать о деструкции легочной ткани, когда происходит разрушение кровеносных сосудов и возможен выброс свежей крови вместе с мокротой при кашле. Мокрота при наличии каверн содержит рисовые тельца (линзы Коха), эластические волокна, различные кристаллы. Для фазы распада при туберкулеза легких характерна «тетрада Эрлиха»-наличие в мокроте кислотоустойчивых микобактерий, эластических волокон, кристаллов холестерина и солей кальция. Наиболее благоприятное течение туберкулеза отмечается при высокой реактивности организма, когда некротические процессы выражены слабо. В этих случаях при открытой форме туберкулеза мокрота обычно серовато-желтого цвета, слизисто-гнойного характера, студенистой консистенции, комковато-клочковатой формы. При микроскопическом исследовании в ней обнаруживают большое количество лейкоцитов, единичные эритроциты, эпителий бронхов с дистрофическими изменениями и альвеолярные макрофаги в небольшом количестве. Местами на месте казеозного распада встречаются обрывки неизмененных эластических волокон. Микобактерий туберкулеза отдельно и небольшими группами. При низкой реактивности организма развивается фиброзно-кавернозная форма туберкулеза, при которой характерна мокрота желтого цвета, местами кровянистая, гнойного характера с примесью крови, вязкой консистенции, комковато-клочковатой формы. Она часто содержит патологические примеси- в частности , рисовые зерна. При микроскопии - большое количество лейкоцитов и эритроцитов. В рисовых зернах на фоне казеозного распада выявляются эластические и коралловидные волокна, расположенные разрозненно и группами. Микобактерии при этой форме туберкулеза обнаруживаются в большом количестве. При резком снижении сопротивляемости организма старый петрифицированный очаг может рецидивировать. При этом в мокроту поступают микобактерии туберкулеза и другие компоненты тетрады Эрлиха, одним из которых является обызвествленные эластические волокна. Они пропитаны солями кальция, имеют вид утолщенных нитей. Вторым элементом тетрады Эрлиха является обызвествленный казеозный распад. При микроскопии они имеют вид дорожек из черных точечных масс. Третий элемент - кристаллы холестерина, четвертый -микобактерии туберкулеза.

Эластические волокна при туберкулезе могут обнаруживаться в мокроте в виде групп и скоплений различной величины как среди гноя, так и в мелких клочках, обнаруживаемых при тщательном отборе мокроты. Кроме того, они встречаются в виде отдельных волокон и их обрывков. Обнаружение этих обрывков и единичных волокон имеет большое значение для диагностики открытых форм туберкулеза. Нередко микобактерии туберкулеза обнаруживают лишь в тех препаратах, в которых были выявлены эластические волокна. Поэтому необходимо отмечать в препарате участки, где были обнаружены эластические волокна. Именно в этом участке выявляются микобактерии туберкулеза после окраски препарата по Цилю- Нельсону.

Контроль качества выявлений КУМ при микроскопии

Важным элементом обеспечения качества выполняемых исследований является регулярное осуществление внутрилабораторного контроля качества микроскопических исследований, который достигается систематическим наблюдением за проводимой в лаборатории работой и оценкой эффективности.

Контроль качества осуществляется на всех технологических этапах микроскопических исследований и включает:

- оценку качества поступающих проб;

- контроль за соблюдением рецептуры и методики приготовления реактивов и красителей;

- наблюдение за соблюдением методических приемов при

а) приготовлении мазков (качество предметных стекол);

б) окраске мазков;

в) проведении микроскопических исследований;

г) учете и регистрации результатов.

Кроме того, элементами внутрилабораторного контроля качества является проверка правильности:

- организации рабочих мест (приема и регистрации материала, приготовления и окраски мазка);

- соблюдение правил и сроков хранения реагентов и красителей;

- настройки оборудования;

- микроскопирования положительных и отрицательных контрольных материалов;

Успех применения контроля качества обеспечивается:

- регулярным его применением в лабораторном подразделении;

- правильно обученными ответственными работниками;

- регулярным анализом допущенных ошибок и немедленном их исправлении.

Следовательно необходимо еженедельно и ежемесячно обобщать и анализировать полученные ранее для определения процента положительных результатов.

Схема диагностики туберкулеза

Заключение

В диагностике туберкулеза необходимо стремиться применять комплекс лабораторных исследований и интерпретировать из результатов только с учетом клинической картины заболевания, эпидемиологических данных, а также рентгенологических и других методов диагностики туберкулеза. Правильная и своевременная диагностика туберкулеза органов дыхания позволяет выявить больных на ранних этапах развития заболевания. Химиотерапия, начатая вовремя, позволит предотвратить развитие у них распространенных, прогрессирующих форм с выделением КУМ.

Использованная литература

1. Альтгаузен А.Я. Клиническая лабораторная диагностика. - М., 1959.

2. Калинин B.C. Методика лабораторных клинических исследований. - М., 1932.

3. Лифшиц В.М., Сидельников В.И. Медицинские лабораторные анализы. - М.: Триада-Х, 2000. - С. 160-162.

4. Приказ №109 «О совершенствовании противотуберкулезных мероприятий».

5. Российский медицинский журнал. - 1995. - №1. - С.21-25.

6. Руководство по клинической лабораторной диагностике / Под редакцией М.А. Базарновой. - Киев, 1981.

7. Туберкулез / Под редакцией Н.А.Васильева. - М.: Медицина, 1990. -208 с.

8. Туберкулез. Руководство для врачей / Под редакцией академика А.Г. Хоменко. - М.: Медицина, 1996. -496 стр.

9. Хемченко А.Г. Основы диагностики туберкулеза.

10. Ященко Т.Н., Мечева И.С., Руководство по лабораторным исследованиям при туберкулезе. - М.: Медицина, 1973. -260 стр.