Частная микробиология

Для установления типа токсина ставят аналогичную реакцию нейтрализации токсина с моновалентными сыворотками, используя в опыте соответственно 5 мышей.

Посевы материала для выделения клостридий ботулизма делают по методике, одинаковой для всех анаэробов. Причиной отравлений бывают главным образом продукты, консервированные в домашних условиях (овощи, фрукты, грибы, рыба, мясо и др.), а также рыба и колбаса, содержащие ботулинический токсин.

Профилактика и лечение.

Для предупреждения ботулизма необходимо при консервировании продуктов соблюдать все условия, обеспечивающие их полную стерильность. В качестве специфической профилактики используют ботулинический анатоксин типов А, В, С, D и Е, который входит в состав различных комбинированных химических вакцин. Лицам, употреблявшим продукт, где, возможно, содержится возбудитель или ботулинический токсин, вводят как можно раньше противоботулиническую антитоксическую сыворотку. Она является также основным средством, применяемым для лечения ботулизма.

10. Синегнойная палочка

Морфология.

Средние размеры синегнойной палочки 1-3x0,5-1 мкм; в нативных препаратах бактерии подвижны (имеют один или два полярных жгутика). В мазках чистых культур палочки расположены одиночно, попарно либо в виде коротких цепочек. Б мазках из патологического материала их чаще можно обнаружить в цитоплазме фагоцитов, при этом палочки могут деформироваться. Поверхность бактерий покрыта микроворсинками; кроме того, P. aeruginosa синтезирует слизистое вещество, покрывающее тонким слоем микробную клетку. Более вирулентные, так называемые мукоидные штаммы, секретируют это вещество наиболее интенсивно, что даёт основание рассматривать слизь как фактор патогенности.

Культуральные свойства синегнойной палочки

Синегнойная палочка растёт в широком диапазоне температур (4-42 °С), что указывает на способность длительно сохраняться в окружающей среде и противостоять защитному действию повышения температуры тела инфицированного человека. Отличительная особенность микроорганизма-- ограниченная потребность в питательных веществах, обеспечивающая сохранение жизнеспособности в условиях почти полного отсутствия источников питания. P. aeruginosa хорошо растёт на простых питательных средах в аэробных условиях при температуре 30-37 Т, а также и при 42 С, что можно использовать как дифференциально-диагностический признак. Образование слизи -- характерная особенность вирулентных штаммов синегнойной палочки; слизь придаёт вязкость бульонным культурам и колониям. В жидких средах синегнойная палочка образует характерную серовато-серебристую плёнку; по мере старения культуры возникает помутнение среды по направлению сверху вниз. На плотных средах обычно образует небольшие (2-5 мм) выпуклые S-колонии. Бактерии также могут формировать плоские, неправильной формы колонии с волнистыми краями либо складчатые колонии с неровной поверхностью («маргаритки»). На плотных средах у многих штаммов синегнойной палочки наблюдают феномен радужного лизиса -- появление на поверхности колоний плёнки, переливающейся всеми цветами радуги в отражённом свете. Феномен радужного лизиса обусловлен спонтанным действием бактериофага и характерен только для P. aeruginosa (его можно рассматривать как дополнительный таксономический признак)

Антигены.

Синегнойная палочка обладает О- и Н-антигенами. По О-антигену разделена на серовары.

Патогенность и патогенез.

Вирулентность синегнойной палочки обеспечивается гликопротеидной капсулоподобной оболочкой, пилями, белками наружной мембраны клеточной стенки, участвующими в адгезии. P.aeruginosa продуцирует ряд токсинов и ферментов. Гликопротеид капсулоподобной оболочки легко отделяется от бактериальной клетки. Он обеспечивает защиту от фагоцитоза, а также является токсичным для клеток хозяина. Экзотоксин А - термолабильный белок, ответственный за инва-зивные свойства и угнетающий иммуногенез. Механизм действия заключается в блокировании синтеза белка.

Мембранотоксины, обладающие гемолитическими свойствами, можно подразделить на два типа. К гемолизину 1 типа относят термолабильный белок с лецитиназной активностью, способствующей возникновению очагов некроза. Гемолизин II типа - термостабильный белок, усиливающий действие гемолизина I типа. Способен растворять липиды мембран, что в случае эритроцитов приводит к гемолизу.

Лейкоцидин лизирует лейкоциты. Он представляет собой белок, тесно связанный с цитоплазматической мембраной. Выделяется только при аутолизе бактериальных клеток. Некоторые штаммы P.aeruginosa продуцируют энтеротоксин.

Синегнойная палочка продуцирует нейраминидазу и ряд протеолитических ферментов. Некоторые протеазы расщепляют эластин, казеин, фибрин. Протеазы продуцируются в виде неактивных проферментов, которые активируются особой протеазой. Все протеазы ингибируют активность белков иммунной системы.

Наряду с перечисленными токсинами и ферментами системное действие на организм хозяина оказывает Л ПС. Заболевания, вызванные синегнойной палочкой, прежде всего связаны с гнойно-воспалительными процессами, возникающими в ассоциациях со стафилококками, протеем, эшерихиями. Они наблюдаются при инфицировании операционных ран, особенно ожогов. P.aeruginosa - один из главных возбудителей госпитальной инфекции.

Иммунитет.

В основном обеспечивается факторами неспецифической защиты организма. Фагоцитоз бактерий стимулируется противокапсульными антителами. Заболевание чаще возникает у иммунодефицитных лиц.

Экология и эпидемиология.

Широкое распространение синегнойной палочки во внешней среде способствует легкому инфицированию людей. Она длительное время сохраняется на предметах обихода, плохо простерилизованном медицинском инструментарии и особенно в раневом отделяемом. Заражение происходит, главным образом, контактным путем. В больницах, особенно хирургических отделениях, распространены эковары P. aeruginosa, высокоустойчивые к антибиотикам и антисептикам. Такие штаммы контаминируют лекарственные препараты и могут сохранять свою жизнеспособность в неконцентрированных растворах антисептиков и дезинфектантов.

Лабораторная диагностика.

Заподозрить синегнойную инфекцию позволяет характерное окрашивание ран, перевязочного материала в сине-зелёный цвет. Для выделения идентификации возбудителя используют культуральный метод. Забор материала следует производить до начала антибактериальной терапии. Растет на простых питательных средах, в частности используют агар Мюллер-Хинтон. При росте на плотных средах дает характерный феномен радужного лизиса, развивающийся спонтанно, при образовании пигмента окрашивает некоторые среды в зелёный цвет. Используется метод пиоцианинотипирования, основанный на том, что штаммы резистентны к своему пиоцианину и обладают различной чувствительностью к пиоцианинам других штаммов. На жидких средах дают рост в виде поверхностной пленки, со временем образуется помутнение, распространяющееся сверху вниз.

11. Условно-патогенные грамотрицательные бактерии-протеи, клебсиелы, чудесная палочка

Род Klebsiella.

Род Klebsiella относится к семейству энтеробактерий. Особенность представителей рода -- способность образовывать капсулу. Основной вид -- K.pneumoniae (с подвидами pneumoniae, ozaenae, rhinoscleromatis). Определенную роль в патологии имеют также K.oxytoca, K.planticola, K.terrigena. Вызывают оппортунистические поражения -- госпитальные пневмонии, инфекции мочевыводящих путей, диареи у новорожденных. Клебсиеллы вызывают маститы, септицемии и пневмонии у животных, постоянно обнаруживаются на коже и слизистых оболочках человека и животных.

Клебсиеллы -- прямые неподвижные палочки различных размеров. Факультативные анаэробы. Оксидаза -- отрицательны, каталаза- положительны.

Культуральные свойства.

Хорошо растут на простых питательных средах. Оптимум рН -- 7,2-7,4, температуры -- от +35 до 37 градусов Цельсия, хотя клебсиеллы могут расти в широком диапозоне температур. На плотных средах чаще образуют мутные слизистые колонии, на жидких средах -- равномерное помутнение, иногда со слизистой пленкой на поверхности.

Антигенная структура.

Выделяют капсульные (К) и соматические (О) антигены. Для серотипирования в РА используют К- антигены (безкапсульные варианты в РА не выявляют) с антиК- сыворотками. Некоторые К- антигены родственны К- антигенам стрептококков, эшерихий и сальмонелл.

Факторы патогенности.

К ним относят полисахаридную капсулу (К- антиген), эндотоксин, фимбрии, сидерофорную систему (связывает ионы двухвалентного железа и снижает их содержание в тканях), термолабильные и термостабильные экзотоксины.

Клинические проявления.

Для K.pneumoniae (subsp. pneumoniae) характерны госпитальные бронхиты и бронхопневмонии, долевые пневмонии, инфекции мочевыводящих путей, поражения мозговых оболочек, суставов, позвоночника, глаз, а также бактеремии и септикопиемии. Подвид ozaenae вызывает особую форму хронического атрофического ринита -- озену, подвид rhinoscleromatis -- хроническое гранулематозное поражение дыхательных путей.

Лабораторная диагностика.

Основной метод -- бактериологический. Чаще используют дифференциально -- диагностическую среду К-2 (с мочевиной, рафинозой, бромтимоловым синим), на которой через сутки вырастают крупные блестящие слизистые колонии. Колонии окрашенные (желтые или зеленые). Идентификация культур -- по биохимическим свойствам и в РА с К- сыворотками (определение серогруппы).

Лечение.

Одна из особенностей клебсиелл -- их множественная лекарственная устойчивость и развитие поражений на фоне снижения резистентности организма. Антибиотики применяют при генерализованных и вялотекущих хронических формах клебсиеллезов как правило в сочетании с препаратами, стимулирующими иммунитет. Препараты выбора -- аминогликозиды и бета- лактамовые антибиотики широкого спектра действия.

Род Proteus.

Род Proteus относится к семейству энтеробактерий. Род получил название в честь сына Посейдона Протея, способного менять свой облик. Представители рода способны менять внешние проявления роста на плотных питательных средах, а также отличаются наибольшим плеоморфизмом (изменчивостью морфологии) по сравнению с другими энтеробактериями.

Протеи расщепляют тирозин, восстанавливают нитраты, оксидаза -- отрицательны, каталаза -- положительны. Они обитают в кишечниках многих видов позвоночных и безпозвоночных животных, почве, сточных водах, разлагающихся органических остатках. Могут вызывать инфекции мочевыводящих путей у человека, а также септические поражения у пациентов с ожогами и после хирургических вмешательств. Достаточно часто вызывают также пищевые токсикоинфекции. Наиболее часто роль в патологии имеют P.vulgaris и P.mirabilis.

Культуральные свойства.

Протеи растут на простых средах в широком диапозоне температур. Оптимальная рН -- 7,2-7,4, температура -- от +35 до 37 градусов Цельсия. Колонии протеев в О- форме округлые, полупрозначные и выпуклые, Н- формы дают сплошной рост. Рост протеев сопровождается гнилостным запахом. Характерен феномер роения, Н- формы дают на МПА характерный ползучий рост в виде голубовато -- дымчатой нежной вуали. При посеве по методу Шушкевича в конденсационную влагу свежескошенного МПА культура постепенно поднимается в виде вуали вверх по поверхности агара. На МПБ отмечают диффузное помутнение среды с густым белым осадком на дне. На среде Плоскирева формируют блестящие прозрачные желтовато- розовые колонии (с подщелачиванием и пожелтением среды вокруг колоний). В качестве сред обогащения используют среды Мюллера, Кауфмана, 5% желчный бульон.

Антигенные свойства.

Как и у других энтеробактерий, у протеев имеются О- , Н- и К- антигены. Соматические О-антигены термостабильны, жгутиковые Н- антигены термолабильны. Для серологической идентификации определяют структуру О- и Н- антигенов. У протеев ОХ имеется антигенное родство с риккетсиями. Это их свойство ранее применяли для серологической диагностики риккетсиозов.

Факторы патогенности.

К ним относят ЛПС клеточной стенки, способность к “роению”, фимбрии, протеазы и уреазу, гемолизины и гемагглютинины.

Лабораторная диагностика.

Основной метод -- бактериологический. Используют дифференциально -- диагностические среды (Плоскирева), среды обогащения и МПА по методу Шушкевича. Чистую культуру идентифицируют по биохимическим свойствам, серологическая дифференциация проводится в РА живой и гретой культуры с поливалентными и моновалентными О- и Н- сыворотками. Самый простой метод определения -- по феномену роения. Среди биохимических методов -- просветление и побурение сред с тирозином и триптофаном характерно для бактерий группы Proteus- Providencia- Morganella. Важный дифференциальный признак протея -- способность дезаминировать фенилаланин до фенилпировиноградной кислоты, в присутствии FeCl2 это приводит к окрашиванию среды в зеленый цвет. Дифференциальный признак, отличающий протеи от Providencia и Morganella -- покраснение лизино -- железного агара, обусловленное дезаминированием лизина и образованием кетокислот.

Лечение.

При дисбактериозах кишечника, связанных с протеями (колиты), можно использовать протейный фаг и препараты, в состав которых он входит (интести- фаг, коли- протейный бактериофаг). Протеи обладают природной устойчивостью ко многим антибиотикам. При гнойно -- септических заболеваниях, связанных с Proteus, применяют антибиотики выбора -- ампициллин, цефалоспорины третьего поколения, фторхинолоны

12. Возбудители кишечного иерсиниоза и псевдотуберкулеза

Иерсиний псевдотуберкулеза

Открыты Малассе и Виньялем в 1983 г.

Морфология и физиология

Y. pseudotuberculosis представляют собой грамотрицательныеные кокковидные палочки. Они имеют жгутики и образуют капсулу. Неприхотливы к питательным средам. Размножаются в широком диапазоне температур. На плотных средах образуют S- и R-формы колоний. Являются факультативными анаэробами. Биохимические свойства представлены в табл. 20.10.

Антигены

Бактерии псевдотуберкулеза имеют Н- и О-антигены. О-антиген отличается от подобных антигенов других энтеробактерий структурой повторяющихся звеньев полисахаридной цепи ЛПС. Различают 10 сероваров этих бактерий, которые отличаются друг от друга по О-антигенной специфичности. Наибольшее значение в патологии человека имеют I, III и IV серовары.

Патогенез

Вирулентность обусловлена способностью подавлять фагоцитоз, их пенетрационными и инвазивными свойствами. Токсичность связана с эндооксином (ЛПС), а также продукцией белкового экзотоксина. После проникновения возбудителя в желудочно-кишечный тракт поражается лимфоидная ткань кишечника и возникает мезентериальный лимфоаденит. Бактерии размножаются в лимфоцитах, а затем проникают в кровь, вызывая бактериемию. В патогенезе псевдотуберкулеза существенное значение имеет аллергизация организма.

Иммунитет

При псевдотуберкулезе имеет место гуморальный и клеточный иммунный ответ. Последний выражен в аллергизации организма и формировании ГЗТ. Антитела не обладают протективными свойствами, что приводит к возникновению повторных заболеваний.



Экология и эпидемиология

Псевдотуберкулез является зоонозной инфекцией. Основной резервуар инфекции в природе - грызуны (полевки, домовая мышь, крысы и др.). Люди заражаются алиментарным путем при употреблении главным образом овощей и фруктов. Способность иерсиний размножаться при температуре 2-40°С приводит к накоплению их в пищевых продуктах хранящихся в холодильниках. В РФ в 1959 г. на Дальнем Востоке была зарегистрирована вспышка заболеваний, получившая название скарлатиноподобной лихорадки, вследствие появления на коже мелкоточечной скарлатиноподобной сыпи.

Псевдотуберкулез

Псевдотуберкулез - острая инфекционная болезнь из группы бактериальных зоонозов, характеризующееся лихорадкой, полиморфной сыпью, гепатолиенальным синдромом, поражением ЖКТ, суставов, лимфатической системы. Возбудитель - Yersinia pseudotuberculosis. Псевдотуберкульозни бактерии имеют соматические О-антигены и жгутиковые Н-антигены, делятся на 13 сероваров и пидсероварив. Заболевание у людей зачастую вызывают иерсинии сероваров I, III, IV. Основным резервуаром и источником инфекции для человека являются дикие и синантропные грызуны, с выделениями которых иерсинии попадают на различные продукты питания. Основной путь передачи возбудителей псевдотуберкулеза алиментарный, хотя нельзя исключить и респираторное инфицирования. Заражение происходит после употребления контаминових иерсинии продуктов, которые хранились при низких температурах (4-12 ° С) в холодильниках и овощехранилищах. В силу своей психрофильности при таких условиях бактерии могут размножаться и накапливаться в пищевых субстратах. При лабораторной диагностике псевдотуберкулеза используют бактериологический, серологический, биологический и аллергический методы. Материалом для исследования служит кровь, пунктат с лимфатических узлов, смывы из носоглотки, мокрота, рвотные массы, кал, моча, желчь.

Бактериологическое исследование

Первичную бактериоскопию можно использовать только при исследовании пунктатов лимфоузлов или органов от трупа. Мазки-отпечатки лучше окрашивать по Граму и Романовскому-Гимзе. Этот метод самостоятельного диагностического значения не имеет и является вспомогательным. Он ориентирует бактериолога на выбор питательных сред. Посевы исследуемых материалов делают на среду Эндо и Серова (100 мл 1% ПВ, 1 мл индикатора фенолрот, 0,75 г глюкозы, рН 7,4-7,6) инкубируют при 37 ° С 48-72 час. Посевы на среду Серова выдерживают 15-20 суток в холодильнике с последующим посевом на дифференциальные среды. Подозрительные колонии мелкие, круглые, выпуклые, бесцветные исследуют микроскопически и пересевают на среду Олькеницького. Колонии Y. pseudotuberculosis в R-форме почти такие же, как у возбудителя чумы, но в своем развитии не имеют стадии "битого стекла". Идентифицируют культуры по обычной схеме (посев на среду Гисса, фаголизис, определения серотипов с помощью диагностических аглютину действующих сывороток). Дифференциацию с другими иерсинии проводят по дополнительным тестам.

Серологическая диагностика

Для серологической диагностики псевдотуберкулеза ставят развернутую объемную реакцию агглютинации (подобно реакции Видаля) с соответствующими диагностикумами. Антитела в крови больных накапливаются на второй неделе болезни. Диагностический титр 1:200 и выше. Еще лучшие результаты дает постановка РНГА с антигенным эритроцитарным диагностикумом. Положительной эту реакцию считают при титре антител 1:400 и выше. Разработана также схема постановки реакции ензиммичених антител с использованием полистирилових планшет с адсорбированным на твердой фазе антигеном.

Биологическа проба

Биологическую пробу лучше проводить на гвинейских свинках, так иерсинии, выделенные от человека, мало патогенные для мышей. Зараженные свинки погибают через 4-12 дней. У животных исследуют мазки - отпечатки из органов и делают посевы на питательные среды с последующей идентификацией выделенных культур.

Аллергическая проба

Аллергическую пробу ставят, начиная со второй недели заболевания. Состояние сенсибилизации развивается с 7-20-го дня и сохраняется в течение 2-5 лет. Аллерген вводят внутрикожно в объеме 0,1 мл. Учет реакции проводят через 48 часов. При положительной пробе возникает покраснение и инфильтрат, которые порой чешутся и болезненны.

Профилактика и лечение

13. Возбудитель чумы

Специфическая профилактика не разработана. Для лечения используют антибиотики широкого спектра действия.

Таксономия.

Y.enterocolitica относится к отделу Gracilicutes, семейству Enterobacteriaceae, роду Yersinia.

Морфологические и тинкториальные свойства.

Возбудитель полиморфен: он может иметь форму либо палочки с закругленными концами, либо овоидную с биполярным окра­шиванием. Спор не имеет, иногда образует капсулу. Перитрих. Некоторые штаммы имеют пили. Грамотрицателен.

Культуральные свойства.

Y.enterocolitica -- факульта­тивный анаэроб. Наиб. благоприятная темп. 25С. Возбудитель неприхотлив и растет на про­стых питательных средах.

Биохимическая активность.

Биохимическая активность возбудителя высокая. Внутри вида по спектру б/х активности: индолообразованию, утилизации эскулина, реакции Фогеса - Проскауэра подразделяются на 5 хемоваров.

Основные б/х признаки: расщепление мочевины, ферментация сахарозы, отсутствие ферментации рамнозы, продукция орнитиндекарбоксилазы.

Антигенная структура. О- и Н-антигены, у некоторых штаммов обнаружен К-антиген. По О-антигену различают более 30 серогрупп, из которых от больных чаще всего выделяют представителей серогрупп 03, 09, 05.

Факторы патогенности.

Образует термостабильный эндо­токсин. Не­которые штаммы выделяют вещество, соответствующее экзо­токсину и обладающее энтеро- и цитотоксическим действием. У иерсиний обнаружены также инвазивный белок и белки, препятствующие фагоцитозу. Адгезивная активность иерсиний связана с пилями и белками наружной мембраны.

Резистентность.

Чувствителен к высокой температуре, солнечным лучам, дезинфицирующим ве­ществам, но очень устойчив к действию низких температур: хо­рошо переносит температуру -20 °С.

Эпидемиология.

Источники болезни для человека - крысы, мыши, животные и птицы. Механизм заражения иерсиниозом фекально-оральный, основным путем передачи является алиментарный: болезнь может возникнуть при употреблении фруктов, овощей, молока, мяса. Но возможны также контактный (при контакте людей с больными животны­ми) и водный пути передачи.

Патогенез.

Возбудитель попадает в организм через рот, в нижних отделах тонкой кишки при­крепляется к эпителию слизистой оболочки, внедряется в клет­ки эпителия, вызывая воспаление. Под действием токсинов усиливается перистальтика кишечника и возникает диарея. Иногда в патологический процесс вовлекается аппендикс, развивается аппендицит. Незавершенный фагоцитоз способствует генерализации процесса. У людей со сниженным иммунитетом могут раз­виться сепсис с образованием вторичных гной­ных очагов в мозге, печени и селезенке.

Клиника.

Различают гастроэнтероколитическую, аппендикулярную и септическую формы. Инкубационный пери­од составляет от 1 до 4 дней. Болезнь начинается остро с по­вышения температуры тела до 39С, общей интоксикации, рвоты, болей в животе, поноса. Течение продолжительное.

Микробиологическая диагностика.

Используют бактериологический и серологический методы исследования. Целью бактериологического метода являются идентификация возбудителя, определение антибиотикограммы, внутривидовая идентификация (установление серовара, биохимического варианта, фаговара). Материалом для бактериологи­ческого метода исследования служат испражне­ния, ликвор, кровь, моча, иногда червеобразный отросток. Материал для исследования помешают в фосфатный буфер и подвергают холодовому обогащению. Серологическая диагностика про­водится постановкой РНГА, с диагностическим титром 1:160. Важное диагностическое значе­ние имеет наблюдение за нарастанием титра антител в динамике.

Лечение.

Этиотропная антибиотикотерапия.



14. Возбудитель холеры

Возбудитель - Vibrio cholerae, серогрупп О1 и О139, характеризуется токсическим поражением тонкого кишечника, нарушением водно-солевого баланса.

Морфологические и культуральные свойства.

Вибрион имеет один полярно расположенный жгутик. Под действием пени­циллина образуются L-формы. Грамотрицательны, спор не образуют. Факультативный анаэроб. Не требователен к питательным средам. Температурный опти­мум 37C.

На плотных средах вибрионы образуют мел­кие круглые прозрачные S-колонии с ровными краями. На скошенном агаре образуется жел­товатый налет. В непрозрачных R-колониях бактерии становятся устойчивыми к действию бактериофагов, антибиотиков и не агглютинируются О-сыворотками.

Биохимические свойства.

Активны: сбраживают до кислоты глюкозу, мальтозу, сахарозу, маннит, лактозу, крахмал. Все вибрионы делятся на шесть групп по отноше­нию к трем сахарам (манноза, сахароза, арабиноза). Первую группу, к которой относятся истинные возбудители холеры, составляют вибрионы, разлагающие маннозу и сахарозу и не разлагающие арабинозу: разлагают белки до аммиака и ин­дола. H2S не образуют.

Антигенная структура.

Термостабильный О-антиген и термолабильный Н-антиген. Н-АГ являются общими для большой груп­пы вибрионов.

Возбудители классической холеры и холеры Эль-Тор объединяются в серогруппу 01. Антигены серогруппы 01 включают в раз­личных сочетаниях А-, В- и С-субъединицы. Сочетание субъединиц АВ называется сероваром Огава, сочетание АС -- сероваром Инаба, сочетание ABC -- Гикошима. R-формы колоний утрачивают О-АГ.

Резистентность.

Вибрионы плохо переносят высушивание. Долго сохраняются в водоемах, пи­щевых продуктах. Биовар Эль-Тор более устойчив в окружающей среде, чем классический вибрион.

Эпидемиология.

Острая кишечная инфекция с фекально-оральным механизмом передачи. Путь передачи - водный, пищевой. Источник инфекции -- больной человек или вибрионоситель.

Факторы патогенности.

Пили адгезии; фермент муциназа, разжижающий слизь и обеспечивающий доступ к эпите­лию. Эпителиальные клетки выделяют ще­лочной секрет, который в сочетании с желчью является прекрасной питательной средой для размножения вибрионов. Токсинообразование вибрионов, которые вырабатывают эндо- и экзотоксины. Экзотоксин (энтеротоксин) холероген-- тер­молабильный белок, чувствителен к протеолитическим ферментам. Холероген содержит 2 субъединицы: А и В. А активизиру­ет внутриклеточную аденилатциклазу, происходит повышение выхода жидкости в просвет кишечника. Диарея, рвота. Фермент нейраминидазаусиливает связывание холерного экзо­токсина с эпителием слизистой кишечника. Эндотоксин запускает каскад арахидоновой кислоты, которая запускает синтез простагландинов (Е, F). Они вызывают сокращение глад­кой мускулатуры тонкого кишечника и подав­ляют иммунный ответ, чем обусловлены диарея.

Клинические проявления.

Инкубационный период 2--3 дня. Боль в животе, рвота, диарея.

Иммунитет

.Гуморально-клеточный. При выздоровлении возникает напряженный не­продолжительный иммунитет.

Микробиологическая диагностика.

Выделение и идентифика­ция возбудителя. Материал для исследова­ния - выделения от больных (кал, рвота), вода.

Для экспресс-диагностики используют РИФ, ПЦР. Бактериоскопический метод в настоящее время не используется.

Лечение:

а) регидратация (восполнение потерь жид­кости и электролитов введением изотоничес­ких, растворов, а также плазмозаменяющих жидкостей внутривенно) антибактериальная терапия (тетрациклины, фторхинолоны).

Профилактика.

Санит.-гиг. мероприятия. Экстренная профилактика антибио­тиками широкого спектра действия, а также вакцинопрофилактика. Современная вакцина представляет собой комплексный препарат, состоящий из холероген-анатоксина и химического О-антигена, обоих биоваров и сероваров Огава и Инаба. Прививка обеспечивает выработку вибриоцидных анти­тел и антитоксинов в высоких титрах.

15. Кампилобактерии. Таксономия. Морфология. Культуральные свойства. Вызываемые заболевания. Принципы лаб.диагностики

Бактерии семейства Campylobacteriaceae

отдела Gracilicutes,

род Campylobacter, 

вид С. jejuni, С. coli и С. Lari

Кампилобактеры -- спиральные бактерии, нередко изогнуты S-образно или в виде «крыла чайки». При культивировании более 48-72 ч образуют кокковидные формы. Подвижны.Подвижность обеспечивается жгутиком, расположеным на одном или двух полюсах. Грамотрицательны, но водные и спиртовые растворы анилиновых красителей воспринимают с трудом; для идентификации бактерии обычно окрашивают карболовым фуксином Циля.

Культуральные свойства. Капнофилы (требуют CO2 - 10-15%) и микроаэрофилы (О2 - 3-15%), в аэробных и анаэробных условиях не растут. Хемоорганотроф. Бактерии требовательны к составу питательных сред. Обязательное условие-- наличие в среде 7-10% эритроцитов и антибиотиков (ванкомицин, амфотерицин В), подавляющих рост сопутствующей флоры. Основой среды может быть агар для выращивания бруцелл или агар на основе тиогликолевой среды (среда Бутцлера). На твёрдых средах образуют колонии двух типов -- плоские влажные слизистые, расползающиеся колонии сероватого цвета с неровными краями, либо мелкие дискретные блестящие выпуклые колонии размером до 1 -2 мм. В жидких средах дают гомогенное помутнение и осадок.

Источник инфекции -- животные, от которых возбудители попадают в организм человека через инфицированные продукты и воду.

Патогенез поражений. Кампилобактеры резистентны к действию желчи и быстро колонизируют верхние отделы тонкой кишки. Колонизация кишечника приводит к развитию воспалительных изменений, отёка и гиперплазии слизистой оболочки, появлению эрозий. Группу повышенного риска составляют дети (особенно до 2 лет), пожилые, страдающие сопутствующими заболеваниями, пациенты с иммунодефицитами.

Вызываемые заболевания. Основное проявление -- гастроэнтерит. У гомосексуалистов нередки случаи кампилобактериозного проктита. В особо тяжёлых случаях развиваются признаки дегидратации и сильные боли в животе, имитирующие острый перитонит. В редких случаях наблюдают симптомы менингизма, а иногда -- настоящий менингит. Характерное осложнение -- реактивный (аутоиммунный) артрит, развитие синдрома Гийе'на-Барре'.

Материалы для исследований -- испражнение, кровь, вода, молоко и различные пищевые продукты.

Методы: бактериоскопические, бактериологические и серологические методы.

Бактериоскопический - Микроскопическое исследование тонкого мазка, окрашенного 1% раствором фуксина в течение 10-30 с, позволяет быстро обнаружить спиралевидные или S-образные бактерии. Типичные формы чаще обнаруживают при окраске кристаллическим фиолетовым. Также можно применять фазово-контрастную микроскопию суспензии испражнений в жидкой среде.

Бактериологический - Кампилобактеры плохо переносят транспортировку-- их следует помещать в консервант, например тиогликоловый бульон (рН 8,5) или щелочную пептонную воду, и хранить при температуре 4 "С. Материал засевают на селективные питательные среды (например, среду Бутцлера). Можно пропускать материал через мембранный фильтр (диаметр пор 0,65 мкм) -- подвижные кампилобактеры быстро проходят через фильтр. Основное достоинство этого метода -- возможность посева фильтрата на неселективные среды (например, КА или ША). Для дифференцирования С. jejuni и С. coli применяют экспресс-тест с гиппуратом (свежевыделенные штаммы С. jejuni всегда дают положительную реакцию в отличие от С. coli). Для дифференцирования С. jejuni и С. lari можно применять тест чувствительности к налидиксовой кислоте (С. jejuni -- чувствителен, С. lari -- резистентен).

Серологический -- Для идентификации Аг бактерий применяют РА с обработанной формалином культурой или РСК (видоспецифическая реакция, требующая соответствующего Аг). В России разработаны диагностикумы для выявления AT в реакции РНГА, применяемые для распознавания кампилобактериозов животных и человека. За рубежом разработаны коммерческие реагенты для выявления AT в РИФ или реакции иммунной сорбции AT, меченных ферментами.



16. Хеликобактерии. Таксономия. Морфология. Культуральные свойства. Вызываемые заболевания. Принципы лаб.диагностики

Сем.Campylobacteriaceae

Род Helicobacter

Виды: 1. H.pylori

2. H.fennelliae;H.cinae; - вызывает проктиты и проктоколиты у гомосексуалистов.

3. H.mustelae-выделен от харьков

Морфологические свойства. Это грамотрицательные, короткие, извитые S-образные бактерии средних размеров, подвижные, имеют 4-5 жгутиков, лофотрихи

Культуральные свойства. Хорошо растут в микроаэрофильных условиях, в аэробных и анаэробных условиях не растут. Температурный оптимум 37°С, не растут при температуре 25-28 и 42°С, хорошо растут на кровяном агаре, на средах, содержащих 10% сыворотки. Не растут на средах, содержащих глицерин, желчные соли и NaCl. Для роста требуются микроаэрофильные условия или повышенное содержание в атмосфере СО2 (капнофилы). Оптимальная температура роста - 37єC. Требовательны к питательным средам, растет на сложных пит. средах с добавлением лошадиной или эмбриональной телячьей сыворотки, растворимого крахмала, активированного угля, низкомолекулярного гидролизата белков и антибиотиков для подавления роста сопутствующей микрофлоры. Культивируют на печеночных средах, кровяном агаре, лучше растут на «шоколадном агаре», дают зону слабого гемолиза. Образуют мелкие блестящие S-колонии на твердых питательных средах.

Биохимические свойства. Оксидазо- и каталазоположительны, проявляют выраженную уреазную активность, обладают фосфатазой, образуют H₂S, не свертывают молоко.

Антигены. Имеется О-АГ - ЛПС, Н-АГ, а также поверхностные мембранные белковые АГ (OMP-белки), по которым определяют типоспецифичность возбудителя с помощью моноклональных АТ.

Источники инфекции.

Человек и животное

Механизм заражения:

фекально-оральный

орально-оральный

хеликобактер производит целый ряд ферментов, одни из них непосредственно раздражают клетки желудка, а другие работают против слизистого слоя, делая его более слабым, оставляя незащищенными стенки желудка от кислоты. Эти действия вызывают воспаление слизистой оболочки желудка, что приводит к гастриту и, в некоторых случаях, к формированию язвенной болезни и даже опухоли.

В общем, наличие Helicobacter Pylori может привести к повреждению желудка и двенадцатиперстной кишки, и, таким образом, связано с возникновением таких заболеваний:

Гастрит

Дуоденит (воспаление двенадцатиперстной кишки)

Язвенная болезнь двенадцатиперстной кишки

Язвенная болезнь желудка

Рак желудка

Лимфома желудка

Лабораторная диагностика.

Материал для исследования: биоптаты слизистой оболочки желудка и двенадцатиперстной кишки.

Фиброгастроскопия с взятием биопсии с пораженных участков слизистой. Требует правильного забора, соблюдения правил транспортировки материала и зависит от качества гистологического обследования. Хорошо применять для первичного обследования с целью установления характера поражения слизистой и места локализации. После проведения курса антибактериальной терапии применение фиброгастроскопии нежелательно - доказано что даже при самой тщательной обработке зонда могут сохранится хеликобактерии

Бактериоскопический метод. Выявляют бактерии в препаратах, окрашенных гематоксилин-эозином или акридиновым оранжевым. В фазовоконтрастном микроскопе определяют характерную подвижность.

Бактериологический метод. Производят посев материала на кровяной агар с амфотерицином, культивируют в термостате 5-7 суток при 37° в микрофильных, аэробных и анаэробных условиях. Вид микроба определяют по характерной морфологии и виде колоний, способности к росту только в микроаэрофильных условиях, по наличию оксидазной и уреазной активности.

Серологический метод основан на определении уровня антител, которые вырабатываются в ответ на хеликобактерии:

1. для определения острой стадии - определение IgA

2. для определения наличия инфекции - определение IgG

Определение уровня иммуноглобулинов является наиболее достоверным (специфичность 91%, чувствительность 97%), наиболее доступным (кровь взятая натощак), наименее инвазивным методом диагностики хеликобактерной инфекции и наиболее приемлемым для контроля излеченности, т.к при проведении ФЭГДС после лечения возможно повторное инфицирование.

17. Возбудитель Туляремии. Таксономия. Характеристика фактора патогенности. Основной метод лаб. Диагностики и специфическая профилактика

Таксономия: отдел Gracilicutes, род Francisella. Возбудитель - Francisella tularensis.

Морфология: мелкие кокковидные полиморфные палочки, неподвижные, грамотрицательные, не образующие спор, могут образовывать капсулу.

Культуральные свойства: Факультативный аэроб, оптим. температура+37С. На простые питательных средах не растет. Культивируется на желточных средах, на средах с добавлением крови и цистеина. Рост медленный. Образуют мелкие колонии, круглые с ровным краем, выпуклые, блестящие.

Биохимические свойства: слабо ферментируют до кислоты без газа глюкозу, мальтозу, левулезу, маннозу, образуют сероводород. Туляремийный микроб по вирулентности разделен на подвиды: голарктическую (не ферментирует глицерин, цитруллин), неарктическую (ферментирует глицерин, не ферментирует цитруллин; среднеазиатскую (ферментирует глицерин и цитруллин, мало вирулентен). 

Антигенные свойства: Содержит соматический О-и поверхностный Vi- антигены. Имеют антигенную близость с бруцеллами. В R- форме теряют Vi- антиген, а вместе с ним вирулентность и иммуногенность.

Факторы патогенности: неарктический подвид - высокая патогенность для человека при кожном заражении, голарктический и среднеазиатский подвиды - умеренно патогенны. Вирулентными являются S-формы колоний. Патогенные свойства связаны с оболочечным антигенным комплексом и токсическими веществами типа эндотоксина. Вирулентность обусловлена: капсулой, угнетающей фагоцитоз; нейраминидазой, способствующей адгезии; эндотоксином (интоксикация); аллергенными свойствами клеточной стенки;

Эпидемиология: природно-очаговое заболевание. Источник инфекции - грызуны. Множественность механизмов передачи. Передача возбудителя через клещей, комаров. Человек заражается контактным, алиментарным, трансмиссивными путями.

Резистентность: в окружающей среде сохраняется долго, нестоек к высокой температуре, чувствителен к антибиотикам (тетрациклин, левомицетин).

Патогенез: На месте внедрения возбудителя (кожа, слизистые оболочки глаз, дыхательных путей, желудочно-кишечного тракта) развивается первичный воспалительный очаг, откуда возбудитель распространяется по лимфатическим сосудам и узлам, поражая их с образованием первичных бубонов; в различных органах формируются гранулемы. Микроб и его токсины проникают в кровь, что приводит к бактериемии и генерализации процесса, метастазированию и развитию вторичных туляремийных бубонов.

Клиника. Инкубационный период 3--7 дней. Болезнь начинается остро, внезапно с повышения температуры тела. Различают бубонную, язвенно-бубонную, глазо-бубонную, абдоминальную, легочную и генерализованную(септическую) клинические формы туляремии. 

Иммунитет. После перенесенной инфекции иммунитет сохраняется длительно, иногда пожизненно; развивается аллергизация организма к антигенам возбудителя.

Микробиологическая диагностика: 

Бактериоскопическое исследование:Из исследуемого материала готовят мазки, окрашивают по Грамму. В чистой культуре - мелкие кокки. В мазках из органов преобладают палочковидные формы. Спор не образуют, грамотрицательные, иногда выражена биполярная окраска.

Бактериологическое исследование и биопроба.Применяются для выделения чистой культуры бактерий туляремии. Наиболее чувствительными животными являются мыши и морские свинки, которые погибают даже при подкожном введении единичных бактерий. Выделение бактерий туляремии проводят на свернутой яично-желточной среде, глюкозоцистиновом кровяном агаре. Вирулентные штаммы образуют S-формы колоний--мелкие, гладкие, беловатого цвета с голубоватым оттенком.

Идентификацию чистой культуры проводят по морфологии бактериальных клеток, характеру роста, биохимическим и антигенным свойствам. Биохимические свойства этих бактерий выявляются на специальной плотной среде с ограниченным содержанием белка. Бактерии туляремии содержат оболочечный антиген, с которым связаны их вирулентные и иммуногенные свойства, и О-соматический антиген. По антигенным свойствам близки к бруцеллам.

Серодиагностика.Ставится реакция агглютинации с туляремийным диагностикумом. Относительно позднее появление агглютининов в крови (на 2-й неделе болезни) затрудняет применение этой реакции для ранней диагностики, однако их длительное сохранение делает возможной ретроспективную диагностику. Обязательно прослеживается нарастание титра агглютинации. Наиболее чувствительным методом серодиагностики туляремии является РПГА. 

Для экспресс-диагностики применяется кровяно-капельная реакция: кровь из пальца наносят на стекло, добавляют каплю дистиллированной воды (для лизиса эритроцитов), вносят каплю диагностикума и смешивают стеклянной палочкой. При наличии в крови агглютининов в диагностическом титре (1:100 и выше) в капле немедленно наступает агглютинация диагностикума; при титрах ниже диагностических агглютинация происходит через 2--3 мин.

Кожно-аллергическая проба. Выпускаются два вида тулярина: для внутрикожной пробы и для надкожной. Проба высокочувствительна и дает положительные результаты у больных, начиная с 3--5-го дня болезни, но также и у переболевших и вакцинированных, поэтому оценка реакции должна проводиться с осторожностью.

Лечение: антибиотики стрептомицинового и тетрациклинового ряда. В случае затяжного течения - комбинированная антибиотикотерапия с использованием убитой лечебной сыворотки. 

Профилактика: специфическая профилактика - применяют живую туляремийную вакцину. Иммунитет длительный, проверяется с помощью пробы с тулярином. 

Туляремийный диагностикум - взвесь убитых бактерий туляремии, применяется в случае постановки реакции агглютинации при серодиагностике.

Тулярин- взвесь туляремийных бактерий (вакцинного штамма), убитых нагреванием, для постановки кожно-аллергической пробы.

Туляремийная живая сухая накожная вакцина - высушенная живая культура вакцинного штамма, для профилактики.

18. Бруцеллы Таксономия. Морфология, Культуральные свойства Факторы патогенности Принципы лаб диагностики

Таксономия: семейства Brucellaceae класса альфа-протобактерий Возбудители бруцеллеза B.melitensis, B.abortus, B.suis, B.canis, B.ovis относятся к отделу Gracilicutes, роду Brucella.

Морфологические и тинкториальные свойства: Мелкие, грамотрицательные палочки овоидной формы. Не имеют спор, жгутиков, иногда образуют микрокапсулу.

Культуральные свойства: облигатные аэробы. B.abortus для своего роста нуждается в присутствии 5--10 % углекислого газа. Оптимальными для роста являются температура 37С. Требовательны к питательным средам и растут на специальных средах (печеночных, кровяной агар). Их особенностью является медленный (в течение 2 нед) рост. В жидких средах - равномерное помутнение с небольшим осадком. На плотных - мелкие, круглые гладкие голубые колонии. Диссоциация от S- к R-формам колоний.

Биохимическая активность: очень низкая; содержат каталазу и оксидазу, нитраты редуцируют в нитриты, цитраты не утилизируют, продуцируют Н₂S.

Антигенная структура. O-антиген - соматический, и капсульный антигены. Две разновидности О-антигена -- А(абортус) и М(мелитензис). Иногда обнаруживают К-антиген.

Факторы патогенности: Образуют эндотоксин, обладающий высокой инвазивной активностью. Продуцируют один из ферментов агрессии -- гиалу-ронидазу. Их адгезивные свойства связаны с белками наружной мембраны.

Резистентность. Быстро погибают при кипячении, при действии дезинфицирующих веществ, устойчивы к низкой температуре: в замороженном мясе они сохраняются до 5 мес, в молочных продуктах -- до 1,5 мес.

Эпидемиология. Зоонозная инфекция. Источник - крупный и мелкий рогатый скот, свиньи, овцы, выделяющие B.melitensis. Люди более восприимчивы к этому виду возбудителя. Реже заражение происходит от коров (B.abortus) и свиней (B.suis). Больные люди не являются источником заболевания.

Патогенез. Проникают в организм через слизистые оболочки или поврежденную кожу, попадают сначала в регионарные лимфатические узлы, затем в кровь, разносятся по всему организму и внедряются в органы ретикулоэндотелиальной системы (печень, селезенку, костный мозг). Там они могут длительное время сохраняться и вновь попадать в кровь. При гибели освобождается эндотоксин, вызывающий интоксикацию.

Клиника: Инкубационный период составляет обычно 1--3 нед. Длительная лихорадка, озноб, потливость, боли в суставах, радикулиты.

Иммунитет: После перенесенного заболевания формируется непрочный иммунитет. Клеточно-гуморальный, нестерильный, относительный.

Микробиологическая диагностика:

Микробиологическая диагностика обычно проводится путем серологических исследований (реакция Райта и Хеддлсона).

Бактериологическое исследование. Для получения гемокультуры кровь засевают в два флакона печеночного бульона. Один из них (для выделения культуры В. melitensis) инкубируют в обычных аэробных условиях, другой (для выделения первичной культуры В. abortus) --с СО₂. В первых генерациях бруцеллы растут очень медленно. На агаре бруцеллы образуют бесцветные колонии, в бульоне -- помутнение и слизистый осадок. В мазках, окрашенных по Граму, обнаруживаются мелкие грамотрицательные формы. Они неподвижны, спор не образуют, в определенных условиях появляется видимая капсула.

Для быстрой идентификации бруцелл ставят реакцию агглютинации со специфическими агглютинирующими сыворотками на стекле и определяют чувствительность к специфическому фагу. Все виды бруцелл не ферментируют углеводы. Их дифференцируют по образованию H₂S, чувствительности к СО₂, действию анилиновых красителей (основной фуксин).

Серодиагностика. Реакция агглютинации Райта с бруцеллезным диагностикумом. Положительные результаты отмечаются спустя 1 нед. после начала заболевания и сохраняются у переболевших многие годы. Диагностический титр реакции 1:200. Для ускоренной серодиагностики применяется реакция агглютинации Хеддлсона, которая ставится с неразведенной сывороткой больного и концентрированным антигеном -- диагностикумом, окрашенным метиленовым синим. При положительной реакции появляются хлопья синего цвета. Реакция положительна при наличии агглютинации на «++».

Для серодиагностики используют РПГА, РИФ, РСК, метод определения неполных антител. В поздние периоды заболевания процент положительных серологических реакций (агглютинации, РПГА и РСК) начинает снижаться и большее диагностическое значение приобретают кожно-аллергическая проба и реакция Кумбса.

Биопроба. Применяется для выделения чистой культуры из материала, загрязненного посторонней микрофлорой. Исследуемый материал вводят морским свинкам подкожно в паховую область. Кусочки органов и лимфатических узлов засевают на питательные среды для получения чистой культуры и ее идентификации.

Кожно-аллергическая проба (реакция Бюрне). На предплечье внутрикожно вводят 0,1 мл бруцеллина. При наличии аллергии уже через 6 ч. могут появиться гиперемия кожи и болезненная отечность. Учет реакции производят через 24 ч. Реакция обладает высокой чувствительностью.

Лечение: Антибиотики широкого спектра действия. Специфическая иммунотерапия убитой лечебной бруцеллезной вакциной или бруцеллина (фильтрат бульонных культур В. melitensis, B.abortus, В.suis, убитых нагреванием . При острых формах - бруцеллезный иммуноглобулин.

Профилактика: Живая бруцеллезная вакцина получена штамма ВА-19А, полученную из В. abortus, создает перекрестный иммунитет против других видов бруцелл.

Бруцеллезный единый диагностикум. Взвесь убитых бруцелл, окрашенных метиленовым синим, применяется при серологической диагностике бруцеллеза постановкой реакции агглютинации Райта и Хеддлсона.

Накожная сухая живая бруцеллезная профилактическая вакцина. Взвесь вакцинного штамма. В. abortus применяется для профилактики бруцеллеза.



19. Критерии дифференцирования видов бруцелл. Особенности иммунитета при бруцеллезе. Специфическая профилактика и лечение

Таблица 68 - Дифференциация видов и биоваров рода Brucella

Признаки	В. abortus биовары	В. canis	В. melitensis	В. neotomae	В. ovis	В. suis
Потребность в СО2	(+)	(+)	(+)	(+)	-	-	-		-						(+)
Образование H2S	+	+	+	+	-	(-)	(+)		-	-	-	-	-	+	-	+	-	-	-
Рост в среде, содержащей	тионин	-	-	+	-	+	+	-		-	-	-	-	-	-1	+	+	+	+	+
основной фуксин	+	-	+	+	+	+	+		+	(-)	+	+	+	-	(-)	(-)	-	+	(+)
Агглютинация моноспецифическими сыворотками	А	+	+	+	-	-	+	+		-	-	-	+	+	+	-	-	+	+	+
М	-	-	-	+	+	-	+	+	-	+	-	+	-	-	-	-	-	-	+
R	-	-	-	-	-	-	-	-	-	+	-	-	-	-	+	-	-	-	-

+ - все штаммы положительные; 

(+) - большинство штаммов положительно; (-) - большинство штаммов отрицательно; - - все штаммы отрицательны; 1) концентрация красителя 1:50 000 (масса/объем), для более четкой дифференциации биоваров 3 и 6 тионин вносят в концентрации 1:25 000, при этом биовар 3 растет, а биовар 6 - нет.



20. Возбудитль сибирской язвы. Таксономия. Факторы патогенности. Отличительные признаки возбудителя сибирской язвы от антракоидов. Специфическая терапия и профилактика

Сибирская язва - острая антропонозная инфекционная болезнь, вызываемая Bacillus anthracis, характеризуется тяжелой интоксикацией, поражением кожи, лимфатических узлов.

Таксономия. Возбудитель относится к отделу Firmicutes, роду Bacillus.

Морфологические свойства. Очень крупные грамположительные палочки с обрубленными концами, в мазке из чистой культуры располагаются короткими цепочками (стрептобациллы). Неподвижны; образуют расположенные центрально споры, а также капсулу.

Культуральные свойства. Аэробы. Хорошо растут на простых питательных средах в диапазоне температур 10--40С, температурный оптимум роста 35С. На жидких средах дают придонный рост; на плотных средах образуют крупные, с неровными краями, шероховатые матовые колонии (R-форма). На средах, содержащих пенициллин, через 3ч роста сибиреязвенные бациллы образуют сферопласты, расположенные цепочкой и напоминающие в мазке жемчужное ожерелье.