Работа в лаборатории

Размещено на http://www.allbest.ru/

1. Основные принципы систематики и классификации микроорганизмов. Современное представление о виде бактерий, разновидности, штамме, клоне

Микроорганизмы - одни из древнейших живых существ, однако некоторые исследователи полагают, что им предшествовали неклеточные формы жизни. Считается, что развитие живого шло от простых к более сложноустроенным организмам.

Вначале в основу классификации (таксономии) микроорганизмов были положены морфологические признаки, так как больше о них человек ничего не знал. К концу XIX в. было описано много видов; разные ученые, в основном ботаники, делили микроорганизмы на группы по признакам, принятым для классификации растений. В 1896 г. К. Леман и Р. Нейман предприняли попытки объединить микроорганизмы в три группы:

- шаровидные (Соссасеае),

- палочковидные (Bacteriaceae) и

- извитые (Spirillaceae).

В 1897 г. для систематики микробов стали использовать наряду с морфологическими и физиологические признаки. В настоящее время используют комплекс признаков: фенотипические (морфологические, культуральные, физиологические и другие свойства), а также генотипические (физико-химические свойства ДНК). Геносистематика позволяет определить микроорганизмы не по сходству, а по родству. Нуклеотидный состав суммарной ДНК в процессе развития микроорганизмов в разных условиях не изменяется. Идентичны по составу ДНК S- и R-формы. Обнаружены микроорганизмы, которые имеют сходный нуклеотидный состав ДНК, хотя и относятся к разным систематическим группам: кишечные палочки и некоторые коринебактерии. Это указывает на то, что при систематике (таксономии) микробов следует учитывать разные признаки.

С 1923 г. Американским обществом микробиологов был выпущен определитель бактерий. В восьмом издании (1974) «Руководства Берги по определению бактерий» все микроорганизмы объединены в царство прокариоты (Procaryotae), в которое включены два отдела:

1) цианобактерии, или сине-зелёные водоросли;

2) бактерии. Бактерии разделены на 19 частей (групп):

- фототрофные;

- скользящие;

- хламидобактерии;

- почкующиеся и (или) стебельковые;

- спирохеты;

- спиральные и изогнутые;

- грамотрицательные аэробные палочки и кокки;

- грамотрицательные факультативно-анаэробные палочки;

- грамотрицательные анаэробные бактерии;

- грамотрицательные кокки и коккобациллы;

- грамотрицательные анаэробные кокки;

- грамотрицательные хемолитотрофные бактерии;

- метанобразующие бактерии;

- грамположительные кокки;

- палочки и кокки, образующие эндоспоры;

- грамположительные аспорогенные палочковидные бактерии;

- актиномицеты и родственные организмы;

- риккетсии;

- микоплазмы.

В девятом (1984) издании «Руководства Берги по определению бактерий» все микроорганизмы разделены на 4 отдела и объединены в царство Procaryotae.

1. Отдел Gracilicutes (классы Scotobacteria, Anoxyphotobacteria, Oxyphotobacteria) объединяет грамотрицательные, полиморфные, бесспоровые микроорганизмы, у которых в состав ригидной клеточной стенки входит пептидогликан (муреин). Сверху упругой стенки располагается наружная мембрана, покрытая слоем белка и гликопротеида. Между клеточной стенкой и цитоплазматичес-кой мембраной грациликут имеется периплазматическое пространство.

2. Отдел Firmicutes (классы Firmibacteria, Tallobacteria) объединяет грамположительные палочковидные, шаровидные и нитевидные микробы. Среди них имеются аэробы, анаэробы и факультативные анаэробы. Подвижные и неподвижные формы, образующие эндо- и экзоспоры.

3. Отдел Tenericutes (класс Mollicutes). Молликуты - полиморфные прокариоты, которые не синтезируют пептидогликан, а следовательно, не образуют клеточной стенки. Функцию стенки выполняет прочная трехслойная цитоплазматическая мембрана. Молликуты нечувствительны к пенициллину. Собирательное название таких микроорганизмов - микоплазмы.

4. Отдел Mendosicutes (класс Archaeobacteria) включает прокариоты с несовершенной клеточной стенкой, в которой вместо му-реина содержится псевдомуреин, в котором отсутствует мурамовая кислота. Клетки имеют форму кокков, палочек и спиралей, а также пирамид, квадратов и т.д.

Классификация микроорганизмов видоизменяется. Появляются работы по описанию новых и реорганизации структуры известных таксонов. По-видимому, с развитием молекулярной биологии и применением других методов исследования классификация микроорганизмов и в дальнейшем будет совершенствоваться.

Н.А. Красильников в книге «Определитель бактерий и актиномицетов» (1949) описывает свыше 6000 названий микроорганизмов и делит их на две группы:

1) организмы, образующие хлорофилл (Schizophyceae);

2) бесхлорофилльные организмы (Schizomyceae), различают четыре обособленных класса:

- актиномицеты,

- бактерии,

- миксобактерии,

- спирохеты.

Каждый из классов делится на более мелкие систематические единицы.

До недавнего времени все живые существа клеточного строения в зависимости от взаимоотношения ядра и органелл с цитоплазмой, состава клеточной стенки и других признаков делили на две группы:

- прокариоты (Procaryotae);

- эвкариоты (Eucaryotae).

Большинство микроорганизмов (бактерии, актиномицеты, спирохеты, риккетсии, цианобактерии) относят к прокариотам, остальные (дрожжи, плесневые грибы, микроскопические водоросли и некоторые простейшие) - к эвкариотам.

Из микроорганизмов раньше других появились прокариоты, а позже более сложноустроенные - эвкариоты.

Археобактерии (Archaeobacteria) - царство живых существ органического мира. Его представители существенно отличаются от ранее известных организмов цитологическими, физиологическими и биохимическими свойствами и представляют одну из древнейших групп живых мельчайших организмов. Полагают, что они появились около трех млрд лет назад, когда в атмосфере Земли не было кислорода. Среди них:

- метанобразующие,

- аэробные сероокисляющие,

- анаэробные серовосстанавливающие,

- термоацидофильные серные аэробы,

- галофилы,

- микоплазмоподобные и другие группы микробов.

Клетки археобактерии имеют форму шара, цилиндра, спирали, луча, квадрата, коробочки и др. Археобактерии могут развиваться при температуре выше 100°С (105°С) и т.д.

Для обозначения микроорганизмов принята двойная (бинарная) номенклатура, которая включает в себя названия рода и вида. Родовое название пишется с прописной буквы, видовое, даже происходящее от фамилии, - со строчной. Например, бациллу сибирской язвы называют Bacillus anthracis, кишечную палочку - Esherichia coli, возбудителя эмфизематозного карбункула - Clostridium chauvoei и т.д.

Основной (низшей) таксономической единицей является вид. Виды объединяются в роды, роды - в семейства, семейства - в порядки, порядки - в классы, классы - в отделы, отделы - в царства.

Вид - это совокупность популяций, имеющих общее происхождение и генотип, морфологические, физиологические и другие признаки, способные в определенных условиях вызывать одинаковые процессы. Вид может быть разделен на подвиды и варианты.

Культура - микроорганизмы, полученные от животного, человека, растения или субстрата внешней среды и выращенные на питательной среде. Культура микроорганизмов, выделенная из одной клетки наз. клон. Чистые культуры состоят из особей одного вида, смешанные представляют собой скопления клеток разных видов. Микробиологи часто употребляют слово «штамм».

Штамм - это культура одного и того же вида, выделенная из разных сред и отличающаяся незначительными изменениями свойств (неодинаковая биохимическая активность, чувствительность к лекарственным веществам и т.д.). Например, кишечная палочка, выделенная от крупного рогатого скота, и такая же палочка, выделенная от свиней, могут быть разными штаммами.

2. Антигенное строение и серологическая идентификация возбудителей сальмонеллёзов

Сальмонеллезы - группы инфекционных заболеваний преимущественно молодняка сельскохозяйственных и промысловых животных (телят, поросят, жеребят, ягнят, пушных зверей, птиц), а также человека.

Возбудители сальмонеллеза - бактерии рода Salmonella, семейства Enterobacteriaceae. Род Salmonella по ферментативной активности условно подразделяют на подроды (I, II, III, IV, V). Большинство сальмонелл, выделяемых от животных, входит в подрод I (S. choleraesuis, S. typhimurium, S. gallinarum, S. pullorum, S. enteritidis, S. dublin, S. abortusovis, S. typhisuis и др.). Сальмонеллы внутри рода идентифицируют по антигенной структуре:

известно свыше 2200 серологических вариантов сальмонелл, она представлена соматическим, или О-антигеном, жгутиковым, или Н-антигеном.

О-Антиген расположен на поверхности микробной клетки и представляет собой термостабильный фосфолипидно-полисахаридный комплекс, не разрушающийся при кипячении в течение 2 ч.

Н-Антигены обладают как специфическими свойствами, характерными для определенного вида и типа (антигены первой фазы), так и неспецифическими (антигены второй фазы). Если сальмонеллы содержат оба жгутиковых антигена, их называют двухфазными, если один - однофазными.

На основании общности соматических антигенов сальмонеллы объединены в серологические группы, которые обозначены прописными буквами латинского алфавита: А, В, С, D и др. Всего 14 основных серологических групп. В лабораториях используется диагностическая схема Кауфмана - Уайта, построенная на анализе О- и Н-антигенов. В соответствии с особенностями структуры О-антигенов в этой схеме выделены 50 О-групп. Каждая группа объединяет определенное количество сероваров, расположенных в алфавитном порядке по обозначению первой фазы их Н-антигена. Первая фаза обозначается строчными буквами латинского алфавита (а, b, с, d, е и т.д.), вторая фаза - арабскими цифрами или латинскими буквами (1, 2, 5, 6; е, d и т.д.).

Для определения серовара сальмонелл биофабрики выпускают поливалентные О-сыворотки, О-моносыворотки, а также монорецепторные Н-сыворотки. Сыворотки используют в реакции агглютинации на стекле.

Антигенная структура сальмонелл основных видов, вызывающих заболевания животных, в том числе птиц, дана в таблице:

Группа	Название серовариантов	О-Антиген	Н-Антиген
			1-я фаза	2-я фаза
А (02)	S. paratyphi A	1,2,12	a	(1,5)
В (04)	S. paratyphi B	1,4, (5), 12	b	1,2
	S. typhimurium	1,4, (5), 12	i	1,2
	S. abortusqui	4,12	-	e, n, x
	S. abortusbovis	1,4,12,27	b	e, n, x
	S. abortusovis	4,12	c	1,6
	S. branderburg	1, 4, 12	l, v	e, n, z15
	S. stanleyville	1, 4, (5), 12, 27	z4, z23	(1, 2)
	S. heidelberg	1, 4, (5), 12	r	1, 2
	S. derby	1, 4, (5), 12	f, g	(1, 2)
	S. reading	1, 4, (5), 12	e, h	1, 5
	S.abony	1, 4, (5), 12, 27	b	e, n, x
	S. stanley	1, 4, (5), 12, 27	d	1, 2
	S. saintpaul	1,4, (5), 12	e, h	1, 2
	S. altendorf	4,12,27	c	1, 7
С1(06,7)	S. choleraesuis	6, 7	(c)	(1, 5)
	S. paratyphi C	6, 7 (Vi)	c	1, 5
	S. typhisuis	6, 7	c	1, 5
	S. oranienburg	6, 7	m, t	-
	S. Thompson	6, 7	k	1, 5
	S. potsdam	6, 7	l, v	e, n, z15
	S.virchow	6, 7	r	1, 2
	S. bareilly	6, 7	y	1, 5
	S. tennessee	6, 7	z29	(1, 2, 7)
С2(06,8)	S. muenchen	6, 8	d	1, 2
	S. newport	6, 8	e, h	1, 2
	S. bovis morbificans	6, 8	r	1, 5
С3(08,20)	S. kentucky	8, 20	i	z6
D1(09,12)	S. typhi	9, 12, (Vi)	d	-
	S. enteritidis	1, 9, 12	g, m	(1, 7)
	S. dublin	1, 9, 12, (Vi)	g, p	-
	S. rostock	1, 9, 12	g, p, u	-
	S. moskow	9, 12	g, q	-
	S. gallinarum-pullorum	1, 9, 12	-	-
	S. easbourne	1, 9, 12	e, h	1, 5
	S. panama	1, 9, 12	l, v	1, 5
	S. sendai	1, 9, 12	a	1, 5
Е1(03,10)	S. anatum	3, 10	e, h	1, 6
	S. meleagridis	3, 10	e, h	1, w
	S. london	3, 10	l, v	1, 6
	S. veltevreden	3, 10	r	z6
	S. give	3, 10	l, v	1, 7
	S. amager	3, 10	y	1, 2
	S. muenster	3, 10	e, h	1, 5
	S. newington	3, 15	e, h	1, 6

Серологическая диагностика входит в состав лабораторной и заключается в постановке РА. Используют свежие сыворотки от животных или сыворотки, консервированные фенолом (до 0,5%), со сроком их давности не свыше 15 дней. Антиген для реакции агглютинации выбирают в зависимости от вида животного, а именно: сыворотки от крупного рогатого скота исследуют с антигенами S. enteritidis (dublin) и S. typhimurium, от свиней - S. typhisuis или S. choleraesuis и S. typhimurium и т.д.

Для постановки реакции агглютинации готовят двукратное разведение исследуемых сывороток карболизированным (0,5%-м) физиологическим раствором, начиная с разведения 1:25 и до 1:3200. Сыворотку берут по 0,5 мл каждого разведения.

При массовых исследованиях допускают постановку реакции в четырех разведениях (1:50, 1:100, 1:200, 1:400) с последующей проверкой положительных проб в разведениях сыворотки до 1:3200.

Одновременно ставят контроли:

1) с негативной сывороткой в тех же разведениях, что и исследуемые сыворотки;

2) с положительными сыворотками до их предельного титра;

3) антиген с физиологическим раствором без сыворотки.

В пробирки вносят по 0,5 мл соответствующего разведения сыворотки. Затем во все пробирки (в том числе и контрольные) добавляют по 0,5 мл антигена при концентрации клеток 5х10⁸/мл. Штатив с пробирками тщательно встряхивают до получения равномерной суспензии и выдерживают в термостате при 37…38°С 4…10 ч., затем оставляют при комнатной температуре на 14…20 ч, после чего проводят макроскопический учет реакции.

Реакцию считают положительной при наличии агглютинации в разведениях сыворотки 1:200 и выше, при отрицательных результатах реакции агглютинации - в контрольных пробирках. Реакцию считают сомнительной при наличии агглютинации в разведении сыворотки 1:100 и ниже. При получении сомнительной реакции сыворотку крови от этих животных исследуют повторно через 10…15 дней, и в случаях, если титр не повысился, реакцию следует считать отрицательной. Оценивают реакцию агглютинации в крестах.

Возбудитель сальмонеллеза телят - S. enteritidis (dublin) может обусловливать гастроэнтерит у человека вследствие пищевой токсикоинфекции. По антигенной структуре относится к группе D₁. Патогенен для белых мышей. Реже сальмонеллез телят может быть обусловлен S. typhimurium, который вызывает сальмонеллез у водоплавающей птицы и у человека. По антигенной структуре входит в группу В.

Возбудители сальмонеллеза поросят - S. typhisuis (kunzendorf) или S. choleraesuis (suipestifer) помимо заболеваний у свиней могут служить причиной пищевой токсикоинфекции у людей. По О-антигену отнесён к группе С₁. Реже вызывает сальмонеллез S. typhimurium и S. dublin.

Возбудитель сальмонеллезного аборта кобыл - S. abortusequi (открыт в 1893 г.). Поголовье лошадей (в неблагополучном хозяйстве) обследуют серологически (РА). Фекалии исследуют для выявления бактерионосителей. Показателем развития инфекционного процесса у взрослых лошадей служит титр сыворотки в РА выше 1:400. S. abortusequi по О-антигену входит в группу В. В случае невыделения данной культуры из исследуемого материала целесообразно проверить материал на наличие бактериофага S. abortusequi.

Возбудитель сальмонеллеза овец - S. abortusovis. По О-антигену отнесен к группе В. Реже сальмонеллез овец вызывают S. typhimurium, S. anatum.

Возбудитель сальмонеллеза птиц - S. pullorum (S. gallinarum). По антигену отнесен к группе D₁. Сальмонеллез (пуллороз) протекает остро, в септической форме с большим процентом гибели цыплят (и эмбрионов) - до 100% в первые недели жизни. У взрослой птицы пуллороз протекает чаще бессимптомно. Взрослое поголовье птицы обследуют серологическим методом крове-капельной РА с пуллорозным эритроцитарным антигеном. Сальмонеллез у птиц могут вызывать S. typhimurium, S. enteritidis, S. anatum, S. infantis и др.

Возбудитель сальмонеллеза водоплавающей птицы - S. typhimurium (наиболее часто), реже S. anatum и др. Болеют утята и гусята, реже цыплята. У утят и гусят сальмонеллез протекает остро в 6…20-дневном возрасте, птицы старше 2,5 - месячного возраста болеют хронически, взрослые - латентно.

Возбудитель сальмонеллеза пушных зверей - S. typhimurium, S. dublin, S. enteritidis, S. choleraesuis. Болеют серебристо-чёрные лисицы, песцы, нутрии, реже норки, еноты, соболи и речные бобры. Болезнь протекает остро, с высокой лихорадкой, энтеритом, истощением. У беременных животных наблюдают мертворождение или рождение нежизнеспособных щенков.

3. Характеристика лечебных и диагностических гипериммунных сывороток. Принцип изготовления и контроль

В практике широко применяют как с лечебной, так и профилактической целью иммунные сыворотки и иммуноглобулины для создания пассивного иммунитета. Под пассивной иммунизацией понимают введение готовых иммуноглобулинов (антител) животному. Пассивный иммунитет возникает через 20…24 ч после инъекции и длится максимум две-три недели. Иммунные сыворотки получают путем многократного введения антигена животным-продуцентам (волам, лошадям, свиньям, овцам, кроликам и т.д.). Для получения каждого типа иммунных сывороток разработаны регламенты приготовления соответствующего антигена, схемы иммунизации и методы, с помощью которых контролируют количество антител в сыворотке крови.

По направленности действия иммунные сыворотки подразделяют на: - антибактериальные (сыворотка против рожи свиней),

- антитоксические (сыворотка против анаэробной дизентерии ягнят и инфекционной энтеротоксемии овец),

- антивирусные (сыворотка против болезни Ауески сельскохозяйственных животных и пушных зверей).

По достижении необходимого уровня антител у животного берут кровь обычно в объеме 1% массы животного или осуществляют тотальное обескровливание. Полученную кровь сепарируют для получения сыворотки, которую стерилизуют фильтрованием и консервируют 0,25…0,5% фенола, 0,01…0,03% тиомерсала или другими веществами.

При введении гетерологичных (чужеродных) сывороток животным следует всегда помнить, что они могут вызвать анафилактический шок или сывороточную болезнь.

Контроль сывороточных препаратов включает в себя проверку на стерильность, безвредность и специфическую активность.

Стерильность препаратов проверяют посевом на питательные среды (МПА, МПБ, МППБ, агар Сабуро или Чапека).

Безвредность каждой серии обычно контролируют введением сыворотки морским свинкам.

Специфическую активность сыворотки проверяют в зависимости от направленности ее действия.

Определение превентивных (защитных) свойств на естественно-восприимчивых или лабораторных животных заключается в том, что животным вводят подкожно, внутримышечно или внутрибрюшинно сыворотку, а через 20…24 ч иммунизированным и контрольным животным вводят подтитрованную дозу гомологичного вирулентного микроорганизма. Иммунизированные животные должны остаться здоровыми при гибели или характерном переболевании контрольных.

Пример контроля иммунной сыворотки (против рожи свиней).

Контроль стерильности: сыворотку высевают на МПА, МПБ, МППБ, агар Сабуро. Посевы выдерживают при 37 и 20°С (Сабуро) десять дней. Среды должны остаться стерильными.

Контроль безвредности: пяти белым мышам массой 17…20 г. вводят подкожно по 0,5 мл сыворотки, двум морским свинкам массой 250…300 г. - по 10 мл. Все привитые животные должны остаться живыми в течение десяти дней.

Контроль активности: пятнадцати белым мышам массой 17…20 г. вводят внутрибрюшинно по 0,01, 0,02 и 0,03 мл (по пять мышей на дозу) сыворотки. Через 2 ч всем привитым и пяти не привитым мышам вводят подкожно 0,1…0,2 мл суточной культуры вирулентного штамма возбудителя рожи свиней, разведенной 1:200. Сыворотку считают активной, если в течение десяти дней все привитые животные остаются живыми, а контрольные погибают (допускается гибель двух белых мышей, привитых в дозе 0,01 мл).

Диагностические сыворотки в условиях лабораторий применяют для постановки серологических реакций с целью идентификации выделенных микроорганизмов и обнаружения растворимых белков микробного происхождения. Готовят их путем гипериммунизации кроликов или других животных микробными или вирусными антигенами, иногда клетками организма животных (эритроцитами). Используют агглютинирующие сыворотки (сальмонеллезные, колибактериозные, листериозные и др.), преципи-тирующие (сибиреязвенная), гемолитические в РСК. Диагностические иммунные сыворотки часто метят флюорохромами и применяют для экспресс-диагностики инфекционных болезней (флюоресцирующая сальмонеллезная сыворотка, листериозная и др.). Из диагностических сывороток готовят иммуноглобулины (антирабический флюоресцирующий иммуноглобулин для диагностики бешенства).

Диагностические сыворотки должны обладать строгой специфичностью и высокой чувствительностью.

4. Ознакомьтесь и опишите работу ветеринарной лаборатории, обслуживающий ваш участок. Примите участие в лабораторной диагностике инфекционного (бактериального происхождения) заболевания. Опишите подробно порядок этого исследования и его результаты

Ветеринарная лаборатория ГУВ МО «Можайская районная СББЖ» расположена по адресу: 143200, Московская обл., г. Можайск, ул. Луговая, д. №22, тел. 8-49638-27771, в общем одноэтажном кирпичном здании с ветеринарной лечебницей, отделен капитальной кирпичной стеной, имеется отдельный вход, здание приспособленное. Функционирует с 1972 года. Территория огорожена высоким забором, заасфальтирована. Холодное водоснабжение - централизованное. Горячее водоснабжение - от титана. Отопление - от собственной котельной. Тип канализации - выгреб. Вентиляция - естественная.

Общая площадь - 160 кв. м., количество комнат - 14. Набор помещений:

1. прием и регистрация материала -7,9 кв. м.;

2. вскрывочная, посев лабораторного материала - 6,9 кв. м.;

3. бак. кабинет -14,4 кв. м.;

4. бокс - просмотр и посев материала - 3 кв. м.;

5. автоклавная -8,8 кв. м.;

6. моечная -10,7 кв. м.;

7. средоварочная - 6,4 кв. м.;

8. серологический кабинет - 19,2 кв. м.;

9. радиологический кабинет - 7,8 кв. м.

10. химико - токсикологический кабинет -16,1 кв. м.;

11. бокс в токсикологическом кабинете -5.6 кв. м.;

12. комната отдыха - 8 кв. м.;

13. кладовая - 7,5 кв. м.;

14. туалет для персонала - 2,3 кв. м.

Комната приема и регистрации материала оборудована столом с покрытием из пластика, раковиной, столом-каталкой. Из комнаты приема через окошко материал поступает во вскрывочную.

Вскрывочная оборудована секционным столом с оцинкованным покрытием, столом для проведения фиксации и окраски мазков. Возле раковины в бак. отделе и вскрывочной установлены бутылки с тубусом, в которых налит дезраствор (хлорамин 1%). Полы во вскрывочной из плитки, стены в высоту из глазурованной плитки, потолок окрашен масляной краской. Имеются бутыли с дезраствором и дополнительный комплект спецодежды (халат, перчатки, фартуки, нарукавники). Имеется холодильник, термостат, бактерицидная лампа, на полу - дезоковрики. Во вскрывочной производится обработка и посев патматериала, приготовление мазков, приготовление материала для заражения лабораторных животных. После микроскопии и проведения реакции преципитации (поступающего материала для исследования на сибирскую язву) материал на отдельной кювете помещается в холодильник до окончания исследований, а посевы помещаются в термостат.

Из вскрывочной через дверь посевы поступают в бокс бак. отдела для просмотра и пересева. Бокс оборудован термостатом, столом и бактерицидной лампой. Работа проводится лаборантом в спецодежде и фартуке и перчатках. По окончанию работ проводится тщательная дезинфекция столов и инструмента, согласно требованию правил работы в бакотделе. После получения отрицательного результата патматериал собирается в бюксы и автоклавируется при 1,5 атм. 126* 1 час.

Пат.материал, от которого получен положительный результат, уничтожается путем автоклавирования при 1,5 атм. 126 * 2 часа или сжиганием. Биопробы с положительным или отрицательным результатам уничтожаются путем сжигания. Пробирки, чашки с культурами после просмотра помещаются в бюксы и автоклавируются при 1,5 атм. 126 * в течении 1-2 час. Инструменты, стекла, пипетки, применяющиеся для исследования на бруцеллез по реакциям РА, РСК, РБП и на лейкоз путем подсчета лейкоцитов и серологической реакции в РИД кипятятся после работы в 2% растворе пищевой соды 30 - 60 мин.

Отработанный материал и посевы укладываются в бюксы и отправляются в автоклавную для уничтожения. В автоклавной - два автоклава: для приготовления сред и для уничтожения материала и посевов. После автоклавирования посуда поступает в моечную, отработанный материал сжигается.

Для проведения бактериологических исследований мяса в бак. отделе установлены специальные столы.

Серологический отдел располагается в отдельной комнате, имеет всё необходимое для соблюдения правил по выполнению работ с поступающим материалом, кровью: оборудован двумя холодильниками, двумя термостатами, центрифугой и др. оборудованием. После окончания работ поверхность столов фломбируется. Отработанные пробы крови заливают на 24 часа 5% раствором хлорамина, пробирки Флоринского заливают 3% р-м хлорамина на 60 мин. После экспозиции пробирки отправляются в моечную, отработанный материал утилизируется сжиганием.

В моечной комнате, автоклавной полы из плитки, стены в высоту из глазурованной плитки, потолки покрыты масляной краской.

Для лабораторных животных построен виварий. Зараженные животные содержатся отдельно.

Непосредственно мне пришлось ознакомиться с методами лабораторной диагностики и биологическими свойствами возбудителей эшерихиозов.

Лабораторная диагностика эшерихиоза основана на результатах бактериологического исследования, которое включает в себя обнаружение возбудителя в исходном материале методом световой микроскопии, выделение чистой культуры, идентификацию возбудителя на уровне вида и определение его принадлежности к группе патогенных вариантов.

В лабораторию поступил патматериал (селезенка, доля печени с желчным пузырем, брыжеечные лимфатические узлы от телёнка) для исключения колибактериоза с МТФ Перещапово.

В первый день сделала посевы из патологического материала на чашки со средой Эндо. Е. coli - факультативный анаэроб, температурный оптимум 37…38°С, рН 7,2…7,4, к питательным средам нетребователен. Посевы из паренхиматозных органов, брыжеечных лимфоузлов делала на среду Эндо, нанося материал на поверхность среды пастеровской пипеткой.

Приготовила мазки-отпечатки (окрашивала по Грамму: на фиксированный мазок поместила полоску фильтровальной бумаги, пропитанную спиртовым раствором метилвиолета (бумажки по Синеву), нанесла на нее несколько капель дистиллированной воды для увлажнения, выдержала 1 мин., бумажку удалила. Препарат, не промывая, обработала раствором Люголя 1 мин.; раствор слила. Затем нанесла 96% этанол на 30 с, после чего препарат тщательно промыла водой и окрасила фуксином Пфейффера 2 мин. Вновь промыла водой, подсушила фильтровальной бумагой) и промикроскопировала мазки (препарат прилагается). Е. coli - палочковидная грамотрицательная бактерия размером (0,3…1) х (1…6) мкм со жгутиками (за редким исключением), спор и капсул не образует. Микробные клетки располагаются одиночно, парно или в виде коротких цепочек, окрашены в красный цвет.

На второй день просмотрела чашки и отобрала 5 колоний, выросших при посеве тканевых органов, характерных для эшерихий: круглых, с ровными краями, с гладкой выпуклой поверхностью, размером 2…4 мм, малинового цвета с металлическим блеском (см. фото). Произвела отвивку колоний в МПБ и после 4 ч инкубирования в термостате сделала посев на МПА (на МПА Е. coli образует круглые, выпуклые, с гладкой поверхностью и ровными краями колонии) для приготовления антигена и заражения белых мышей - ввела по 0,5 мл внутрибрюшинно трём белым мышкам суспензию культуры в физиологическом растворе.

На четвертый день учитывала результаты биопробы. Определяла чувствительность культур к антибактериальным препаратам методом диффузии в агар (метод бумажных дисков).

На пятый день проанализировала результаты:

- биопробы - пали 2 мышки, что говорит о патогенности выделенной культуры, а значит серологической типизации не подвергаются;

- чувствительности культур к препаратам.

Оформила экспертизу.

Бактериологический диагноз на колибактериоз у млекопитающих считают установленным при выделении культур эшерихий из селезенки, костного или головного мозга без определения их патогенности и серологической принадлежности; при выделении не менее чем из двух органов животного культур эшерихий, патогенных для белых мышей или принадлежащих к О-серогруппам, признанным патогенными для животных.

Список литературы

микроорганизм бактерия штамм ветеринарный

1. Ассонов Н.Р. Микробиология. - М., 2001.

2. Костенко Т.С. и др. Практикум по ветеринарной микробиологии и иммунологии. - М., 2001.

3. Радчук Н.А. Ветеринарная микробиология и иммунология. - М., 1991.

Размещено на Allbest.ru