Лабораторная диагностика инфекционного ларинготрахеита

Размещено на http://www.allbest.ru/

3

Министерство аграрной политики Украины

Харьковская государственная зооветеринарная академия

Кафедра вирусологии и иммунологии

РЕФЕРАТ

НА ТЕМУ: «Лабораторная диагностика инфекционного ларинготрахеита»

Харьков 2010

Инфекционный ларинготрахеит (ИЛТ) - вирусное высококонтагинозное заболевание птицы отряда куриных, сопровождающееся поражением слизистой оболочки трахеи, гортани, конъюнктивы глаз. К заболеванию восприимчивы куры, индейки, фазаны, наиболее предрасположен молодняк до 1 года. Протекает в двух формах: ларинготрахиальной и конъюнктивальной.

Свойства вируса.

Семейство герпесвирусов (F. Herpesviridae), подсемейство

Alfaherpesvirinae, род Varicellovirus

· структура: размер - 120-180 нм, форма - сферическая, имеется нуклеотид - сердцевина вируса. Капсид - состоит из 162 капсомеров, имеется мембрана и тегумент, суперкапсид - с поверхностными АГ в виде шипов.

· геном: ДНК 2-х цепочечная, фрагментированная (прерывистая в отдельных местах), инфекционна. Тип симметрии кубический, имеется 120 -180 тыс. пар нуклеотидов.

· химический состав: ДНК - 6%, белки - 70%, липиды - 22%, углеводы - 2%.

· Устойчивость - к охлаждению, глицерину, чувствительность к жирорастворителям.

· Репликация происходит в ядре. Вирионы получают внешнюю липопротеиновую оболочку при почковании через ядерную мембрану. Вирионы освобождаются из клетки путем экзоцитоза, транспортируясь через цитоплазму в мембранных везикулах, которые сливаются с плазмолеммой. Цикл репродукции длится от 12 до 70 часов и больше.

· АГ вариабельность, родство: все штаммы в РН разделены в 11 групп, различающиеся по тропизму, вирулентности для КЭ и птиц, скорости репродукции на культуре клеток.

· Вирус проникает в организм через конъюнктиву, носовую или ротовую полость и репродуцируется в эпителиальных клетках.

Клиническая картина.

Инкубационный период заражения составляет 6-10 дней и зависит прежде всего от естественной резистентности птицы, вирулентности вируса и условий содержания. Различают острые, подострые, хронические и бессимптомные формы течения болезни. При острых формах отмечают затруднённое дыхание как следствие фибринозно-геморрагического воспаления трахеи. Довольно часто отмечают ринит, синусит, конъюнктивит, панофтальмию. Резко выражено падение яйценоскости до 30-50% (в зависимости от тяжести течения болезни). Смертность от удушья может достигать 50%. Клинические признаки при подострых формах течения стерты. Наблюдаются конъюнктивиты, кашель, чихание. Протекает в двух формах: ларинготрахиальной (кашель, удушье, хрипы, налеты белого цвета, гиперемия слизистой дыхательного тракта, открыв клюв - птица «поет») и конъюнктивальной (катарально-фибринозный конъюнктивит).

Клинические признаки удушения при ИЛТ

Кровоизлияния в слизистой оболочке трахеи при инфекционном ларинготрахеите (ИЛТ)

Отбор материала для исследования. Для вирусологического исследования от больных птиц берут экссудат из трахеи, от павших или вынужденно убитых в начальной фазе болезни (между 2 - 7 дн) - слизистые оболочки носовых ходов, гортани, трахеи, конъюнктивы, и кусочки легких. Материал замораживают и сохраняют при -20⁰С и ниже. Для гистологических исследований материал помещают в 10%-ный раствор нейтрального формалина. Из патологического материала готовят суспензию 1:5 на растворе Хенкса или изотоническом растворе NaCl, центрифугируют при 1500 - 2000 мин^-1 в течении 15 мин, к надосадочной жидкости добавляют по 1000 ЕД пенициллина и 500 мкг стрептомицина в расчете на 1 мл, выдерживают в течении 3 - 8 ч при 2-4⁰С. Затем используют для инокуляции КЭ, КК или молодых не иммунных к ИЛТ цыплят. Также отбирают парные сыворотки крови.

Непосредственно лабораторная диагностика.

Экспресс методы: РИФ (р-я иммунофлуоресценции), ИФА (иммуноферментный анализ), внутриядерные тельца-включения Зейфреда.

Изоляция и индикация вируса.

1. КЭ - 10 - 12дней, заражение на ХАО. Через 4 -6 суток гибель; некротически-очаговые, мелкоузловатые поражения ХАО, внутриядерные тельца-включения Зейфреда.

2. КК фибробластов или почек куриного эмбриона, почек цыпленка. Через 3 - 4 суток ЦПД: округление клеток, симпласты, внутриядерные тельца-включения

3. цыплята, зараженные на слизистые оболочки носа, гортани, трахеи, глаз, подглазничного синуса, клоаки. Через 6 - 12 суток клинические признаки болезни, гибель, патологоанатомические изменения.

Идентификация вируса. Реакция нейтрализации (РН), реакция имунофлюоресценции (РИФ), р-я диффузионной преципитации (РДП).

Реакция диффузионной преципитации:

Компоненты реакции:

· 1-2% агар

· Преципитирующая сыворотка

· Исследуемый материал гомогенный

Ход постановки реакции:

Существуют различные способы постановки РДП - макрометод (в чашках Петри), микрометод (на предметных стеклах, в капиллярах).

· Расплавляем на водяной бане заранее подготовленный агар, разливаем его в чашки Петри (толщиной 0,5 см) или на предметные стекла, расположенные строго горизонтально (толщиной 1,5 - 2 мм), ровным слоем без комочков.

· Вырезаем лунки в агаре специальными пробойниками на заданном расстоянии, используя трафарет.

· Дно лунки, при необходимости, заполняем расплавленным агаром.

· Вносим компоненты реакции так, чтоб АГ и АТ могли диффундировать на встречу друг к другу из всех лунок. Нужно следить чтоб компоненты реакции не переливались за края лунок, а только заполняли обьем каждой.

· Создаем условия влажной камеры и помещаем в термостат.

Учет реакции:

Производит через 8 - 10 ч - предварительно, через 48 ч - окончательно. Реакцию учитываем в лучах проходящего света. Положительной считается реакция при образовании линии преципитации между специфической сывороткой и исследуемым антигеном или наоборот, специфическим АГ и исследуемой сывороткой. Характер соединения полос преципитации, образованных АГ сравниваемых систем в реакции с одной и той же сывороткой неоднозначен и определяется степенью сходства и различия АГ. Идентичность компонентов устанавливается по соответствующим линиям преципитации: плавное, полное слияние полос преципитации на границе смежных реакций свидетельствует о полной идентичности или частичном сходстве АГ, тогда как перекрещивание концов полос преципитации - о не идентичности исследуемых АГ.

Ретроспективная диагностика. Реакция нейтрализации (РН), р-я диффузионной преципитации (РДП), ELISA.

Дифференциальная диагностика. Ньюкаслская болезнь, инфекционный бронхит, грипп, оспа, респираторный микоплазмоз, пастерелёз, гемофилёз, авитаминоз А.

Иммунизация. Для предупреждения секундарной инфекции применяют аэрозоли химических препаратов (кристаллический порошок йода и алюминиевая пудра, йодинол, йодтриэтиленгликоль).

В последнее время в неблагополучных хозяйствах возникла необходимость обязательной вакцинации против ИЛТ.

При этом необходимо соблюдать схему вакцинации. Для образования иммунитета птицу вакцинируют двукратно, причём вторая вакцинация должна быть проведена не позднее 4 недель перед началом яйцекладки. Согласно наставлениям по применению вакцин, иммунизации подлежит только клинически здоровая птица, слабый и больной молодняк выбраковывают.

Из различных способов применения вакцин при ИЛТ (клоачный, аэрозольный, на конъюнктиву глаза, с водой) наиболее надёжным считается нанесение вакцины на конъюнктиву глаза. Таким способом, например, применяют живую лиофилизированную вакцину против инфекционного ларинготрахеита Nobilis ILT ("Интервет").

Для специфической профилактики ИЛТ птиц в неблагополучных хозяйствах используют сухую липосомальную вирусвакцину из штамма "ВНИВИП" (ООО "ВНИВИП"- препараты г. Ломоносов). Клинически здоровую птицу вакцинируют аэрозольно с интервалом 16-20 суток, окулярно 20 - 30 суток и клоачно - 30 суток.

Заключение

инфекционный ларинготрахеит вакцинация птица

На мой взгляд, наиболее быстры методом индикации вируса является обнаружение внутриядерных тельц-включений Зейфреда, а также РИФ т. к. она характеризуется высокой чувствительностью, специфичностью и быстрым получением результатов.

Размещено на Allbest.ru